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A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析

作者：汪肖肖; 孙普; 贾怀杰; 李冬; 付元芳; 陈应理; 曹轶梅; 景志忠; 白兴文; 卢曾军; 刘在新 刊期：2019年第10期

为了探索更有效的A型口蹄疫(FMD)表位疫苗,根据已鉴定的A型口蹄疫病毒(FMDV)主要抗原位点,结合基因序列比对分析,选择了A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区进行表位蛋白分子的设计表达。所用表位序列包括A/QH/CHA/2013的VP2 70~81位、118~140位,VP1 G-H环131~157位、C末端188~212位,A/WH/CHA/09 VP1 43~48位、VP3 55~72位,以及非结构蛋白3A中的T细...

非洲猪瘟病毒免提取核酸荧光定量PCR检测方法的建立

作者：张彩虹; 杨俊兴; 林彦星; 刘建利; 曹琛福; 史卫军; 花群义 刊期：2019年第10期

根据非洲猪瘟病毒(ASFV)保守的VP72基因序列,设计特异性引物和探针,经过优化反应体系中各组分及反应条件,建立了直接检测样品中ASFV的荧光定量PCR方法,并分析该方法的特异性和敏感性。结果显示,该直扩荧光定量PCR方法只对ASFV有特异性扩增,对其他几种相似疾病病原的灭活抗原,如猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒、口蹄疫病毒、...

口疮病毒GIF蛋白的原核表达及对小鼠免疫细胞的影响

作者：冯倩; 吴锦艳; 李玲霞; 杜国玉; 尚佑军; 刘湘涛; 刘永生 刊期：2019年第10期

探究口疮病毒GIF蛋白对小鼠骨髓源树突状细胞成熟及Naive CD4^+T细胞极化作用的影响。原核表达口疮病毒GIF蛋白,用纯化后的蛋白刺激小鼠树突状细胞,利用流式细胞术检测细胞表面分子的表达情况,ELISA方法检测细胞培养上清中细胞因子IL-12P40、TNF-α、IL-10、IL-1β的分泌情况。将Naive CD4^+T细胞与经不同质量浓度的GIF蛋白刺激后的树突状细胞共培...

犬副流感病毒实时荧光RPA检测方法的建立

作者：李春华; 魏晓锋; 熊炜; 薛俊欣; 黄忠荣; 李健 刊期：2019年第10期

为快速监控犬猫科动物中犬副流感病毒(CPIV)的感染情况,本研究针对CPIV核衣壳蛋白基因的保守序列,设计特异性引物和荧光探针,建立了CPIV实时荧光重组酶聚合酶等温扩增方法(real-time RPA)。结果表明,该方法具有良好的特异性,与其他犬病毒和同属的副黏病毒均未出现交叉反应;其敏感性与RT-PCR方法相近;将该方法应用于CPIV感染犬的临床组织样本、体...

水貂阿留申病毒抗体胶体金检测方法的开发和应用

作者：王振军; 罗国良; 易立; 郭利; 冯二凯; 程世鹏; 程悦宁 刊期：2019年第10期

为开发一种全新的检测水貂阿留申病毒抗体的检测方法,采用胶体金标记法对水貂阿留申病毒AMDV-G株进行全病毒标记,随后将金标记物固化在固相载体中,同时按顺序将水貂阿留申病毒全病毒以及水貂抗阿留申病毒抗体喷涂于硝酸纤维素膜(NC膜)上,将金标记物固相载体以及包被有抗体及病毒的NC膜连同其他组件组装成试纸条,进行水貂阿留申病毒抗体的检测。...

致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法的建立

作者：李富祥; 高华峰; 邵庆勇; 洪琼花; 朱建波; 赵文华; 杨仕标 刊期：2019年第10期

为建立一种快速鉴别检测致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌的双重TaqMan荧光定量PCR方法,根据溶血性曼氏杆菌16S rRNA和白细胞毒素(lktA)基因保守序列设计特异性引物及探针,并优化反应条件,建立了鉴别致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示:所建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法与其他24种常见牛羊细菌均无交叉...

牛流行热病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：楚会萌; 任亚初; 程凯慧; 解晓莉; 张亮; 孙阳阳; 杨宏军 刊期：2019年第10期

为建立牛流行热病毒(BEFV)的荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中已登录的BEFV的G基因保守序列设计了1对特异性引物。结果显示,建立的标准曲线线性关系较好,其相关系数为0.996 3。该方法仅对BEFV检测为阳性,表明其特异性强。该方法的检测下限约为4.0×10^1 copies/μL,比普通PCR敏感性高10倍。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数...

帕利亚姆病毒血清型特异性RT-PCR检测方法的建立

作者：李占鸿; 杨振兴; 张洁; 肖雷; 廖德芳; 李华春; 杨恒 刊期：2019年第10期

帕利亚姆血清群病毒(Palyam serogroup virus,PALV)包含多种血清型病毒,我国存在Chuzan virus(CHUV)、Bunyip Creek virus (BCV)和D’Aguilar virus (DAV)三种血清型PALV毒株的流行,目前尚无PALV血清型特异性RT-PCR检测方法的报道。本研究根据获取的中国CHUV、BAV和DAV这三种PALV血清型毒株的Seg-2序列,设计合成了3对特异性引物,建立了PALV血清...

利用杆状病毒表达系统表达猪IFN-L3及其抗PEDV活性的研究

作者：郭珊珊; 陈伟业; 薛美; 尹灵丹; 罗毅; 冯力; 刘平黄 刊期：2019年第10期

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞上表达重组猪干扰素L3(rPoIFN-L3)进行抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的研究。首先通过间接免疫荧光和Western-blot验证rPoIFN-L3表达,并用Protein A亲和层析柱进行蛋白纯化;采用表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒(VSV*GFP)检测rPoIFN-L3的抗病毒活性,含rPoIFN-L3的细胞上清的抗病毒活性为1×10^3AU/mL,纯化...

小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作者：周岩岩; 李玲霞; 吴锦艳; 余树芳; 李娇阳; 刘丹; 冯倩; 孙晶晶; 何苗; 魏凡华; 尚佑军 刊期：2019年第10期

为开发可用于小反刍兽疫病毒(PPRV)诊断及其抗原的检测方法,参考GenBank中PPRV Nigeria75/1株N基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得目的基因后连接到载体pCzn1中,转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株,经PCR和双酶切鉴定测序后,将阳性克隆转化至大肠杆菌BL21 (DE3)菌株后采用IPTG进行诱导表达。结果表明,成功地构建了含有小反刍兽疫病毒N基因的重组质粒p...

中国部分地区赛马肠道寄生虫感染情况的调查

作者：魏梓霖; 彭煜师; 朱怡萱; 李治国; 侯旻昱; 王之超; 张龙现; 赵爱云; 齐萌 刊期：2019年第10期

猪源生物被膜乳酸菌的筛选与体外益生特性评价

作者：靳胜男; 舒慧萍; 张冬星; 赵泽林; 康元环; 张蕾; 单晓枫; 钱爱东 刊期：2019年第10期

为了研制优良的猪用微生态制剂,从健康猪的新鲜粪便中成功分离获得1株抑菌效果较好、生物被膜形成能力较强的L-11乳酸菌,经16S rDNA分子生物学鉴定,确定该分离株为约氏乳杆菌。并进一步对其体外益生特性包括产酸能力,耐酸碱、耐胰蛋白酶、耐高温、生长曲线、抑菌性能、黏附性以及对小鼠的致病性进行了检测。结果表明,该菌株具有一定的产酸能力,...

牛结节性皮肤病的流行现状与传播特征及其我国的防控策略

作者：景志忠; 贾怀杰; 陈国华; 何小兵; 房永祥; 王国蒨; 陈思睿; 杨帆; 吕彦蓉; Takele; Tesgera; HURISA; 殷宏 刊期：2019年第10期

2019年8月12日我国首次确诊在新疆伊犁地区爆发牛结节性皮肤病,为充分认识和做好该病的防控工作,防止外来疫情扩散蔓延到我国内地,现将该病的世界流行现状、传播特征以及我国的防控对策进行概括介绍,为有效控制、净化和根除该病提供指导。

扬子鳄IL-1β基因的克隆和生物信息学分析及表达量的测定

作者：苏玉鑫; 费荣梅 刊期：2019年第10期

为研究扬子鳄IL-1β基因的序列、结构以及生物学功能,通过采取成年健康扬子鳄外周血液,进行淋巴细胞的提取,再提取其mRNA,反转录得到cDNA,应用设计的引物进行PCR扩增,克隆出扬子鳄IL-1β基因的CDS区域,对得到测序正确的序列进行生物信息学分析、同源性分析以及进化树构建,同时选取6种组织对扬子鳄IL-1β不同时期的表达水平进行测定和分析。结果显示...

柔嫩艾美耳球虫NADP特异性谷氨酸脱氢酶特性分析

作者：刘桂玲; 朱顺海; 赵其平; 董辉; 黄兵; 赵焕之; 李志行; 王璐; 韩红玉 刊期：2019年第10期

为了研究柔嫩艾美耳球虫NADP特异性谷氨酸脱氢酶(EtNADP-GDH)的分子特性,对该基因进行了克隆和生物信息学分析,利用间接免疫荧光定位、体外入侵抑制、实时荧光定量PCR、Western-blot和体外酶活性检测等方法分析其生物学特性。结果显示,成功获得了EtNADP-GDH基因,该基因编码的蛋白富含包括NAD结合位点在内的多种功能位点。该蛋白主要分布在虫体的...