作者:窦小锋; 林梅 期刊:《临床误诊误治》 2019年第12期
作为一种新型高分子聚合物,树状高分子具有分子量和大小确定、分子间缠结少、黏度低、可运载大量功能性基团等作用,在生物医学领域拥有广泛的应用前景,特别是在肿瘤的靶向基因治疗中,树状高分子具有良好的基因转运作用。本文通过查阅、分析文献的方式,对近年国内外树状高分子载体在前列腺癌基因治疗中的研究进展进行综述。
作者:吴西军; 姚冬静; 刘庆; 杨小燕; 王念雪; 王一慧; 舒莉萍; 何志旭 期刊:《贵州医科大学学报》 2019年第11期
目的:探讨cdh 5-mRNA在野生型斑马鱼胚胎期发育过程中的表达模式。方法:收取tuebingen野生型斑马鱼多个发育时间节点的胚胎,提取其总RNA,体外逆转录后RT-PCR扩增cdh 5基因片段,将cdh 5基因片段插入pCS^2+质粒载体中,挑选阳性单克隆菌落,通过双酶切、测序等方法鉴定pCS^2+-cdh 5重组质粒;重组质粒单酶切后用T3RNA体外转录体系制备地高辛标记的cdh 5基因的反义mRNA探针,对斑马鱼全胚胎进行原位杂交,显微镜下观察各发育节点胚胎cdh 5-...
作者:常平安; 陈瑞; 李薇; 伍一军 期刊:《毒理学》 2005年第03期
目的构建人神经病变靶标酯酶(NTE)酯酶活力域(NESP)真核表达载体,并在细胞中表达。方法利用含有特定酶切位点的引物,通过PCR扩增出其酯酶活力域,经T载体克隆测序正确后,双酶切回收cDN段定向插入到pcDNA3.1(+)中,通过酶切鉴定其真核表达载体的构建。然后将其转染到真核细胞中,通过NTE活力测定,检测其表达效果。结果经PCR获得了NTE的1.6kb酯酶活力域的cDN段,T载体克隆后测序证实完全正确,然后克隆到真核表达载体中...
作者:孟舒; 赵仙先; 黄盛东; 秦永文 期刊:《中国组织工程研究》 2005年第03期
目的 :克隆人血管生成素相关蛋白 2( angiopoietin-related protein 2,ARP2)全长编码基因,使其以体外方式促进血管内皮细胞分化,拟构建 PET32a载体. 方法 :采用反转录多聚酶链反应( RT-PCR)从人脾脏组织中扩增 ARP2 cDNA,构建 PET32a载体,采用 EcoR I, Hind III双酶切以及 DNA测序进行鉴定. 结果 :RT-PCR扩增长度为 1492 bp的基因片段. EcoR I, Hind III双酶切结果显示重组 T载体中含有目的基因片段,测序结果显示编码区无基因突变....
作者:马腾; 刘学政; 刘丽波; 黄波 期刊:《中国组织工程研究》 2005年第07期
目的:从人的胎盘中克隆血管生成素(angiopoietin-1,Ang-1)基因,并分析其结构特征.方法:提取人胎盘组织总RNA,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出Ang-1基因片段,并将其克隆到PGEM-T Easy载体中进行序列分析.结果:获得高质量的胎盘组织总RNA.RT-PCR扩增出1.5 kb的cDN段,成功构建了PGEM-T/Ang-1载体,Blast序列分析与GenBank中AY121504一致.结论:从人的胎盘中克隆Ang-1基因无突变,满足为进一步研构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载...
作者:李一鸣; 陈冠辉; 余东升 期刊:《中华口腔医学研究》 2018年第02期
基因组学和基因治疗的快速发展为许多难以治愈的疾病提供了解决方案,但如何设计安全有效的基因载体是阻碍其临床应用的关键。石墨烯及其衍生物因其独特的物理化学、热学、电学、光学等优良性能,被众多学者认为是一种具有潜在利用价值的基因载体。本文就石墨烯及其衍生物作为基因载体所具有的性能和常见的功能化类型进行综述。
作者:师长宏; 范雄林; 徐志凯; 李元; 柏银兰; 薛莹 期刊:《医学争鸣》 2004年第02期
目的: 构建融合表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)分泌蛋白Ag85B-ESAT6真核表达载体,研究该重组载体在体外的表达和在小鼠体内诱生体液免疫应答的能力. 方法: 设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物,采用PCR的方法从MTB毒株H37Rv-DNA中分别扩增出相应大小的DN段,将片段分别与pGEM-T-easy载体连接后测序. 将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入真核表达载体pcDNA3,挑选出阳性克隆,分别命名为AZ-pcDNA3...
作者:徐容; 潘卫; 沈毅珺; 陈秋莉; 潘欣; 冯春芝; 戚中田; 刘彦君; 邓松华 期刊:《安徽医科大学学报》 2004年第02期
目的进一步改造噬菌体展示载体,使之能更有效地展示各种外源随机多肽文库.方法以pCANTAB5X-IFN-α2b重组质粒为模板,在上游引物中引入Xba Ⅰ、Sac Ⅰ酶切位点,在下游引物中引入Sac Ⅰ、Stu Ⅰ、Sal Ⅰ酶切位点,将用该引物扩增的IFN-α2b衔接片段PCR产物克隆到pMD18-T中,再将该片段用Xba Ⅰ和Sal Ⅰ酶切并将之插入pCANTAB5L的Xba Ⅰ和Sal Ⅰ位点中,经Sac Ⅰ酶切,线性载体片段自连,构成新型噬菌体展示载体pCANTAB5S.结果限制酶切位点Sa...
作者:游捷; 黄清玲; 林旭; 刘礼斌; 林建银 期刊:《福建医科大学学报》 2005年第02期
目的构建晚期糖化终产物受体(RAGE)、核因子-κB(NF-κB)反义RNA单/双基因共表达载体.方法从人脐静脉内皮细胞ECV304中提取总RNA,RT-PCR扩增RAGE基因片段;从糖尿病人外周血单核细胞提取总RNA,RT-PCR扩增NF-κB p65基因片段.分别克隆入PGEM-T载体,酶切鉴定阳性克隆,再经PCR反应获得多量的RAGE,NF-κB 基因片段,反向插入双启动子真核表达载体pBudCE 4.1,构建RAGE、NF-κB反义RNA单/双基因共表达载体.结果 RT-PCR扩增出RAGE基因片段328 bp,...
作者:邸雅南; 胡大荣; 胡学玲; 吴忆贫 期刊:《中华传染病》 2005年第05期
目的探讨C基因截短型HBV突变体对HBV复制的影响.方法构建C基因截短的HBV表达载体pHBV-ΔC,瞬时转染HepG2细胞,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)Western blot检测S蛋白的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)定量分析S蛋白的表达量.pHBV-ΔC与adwR9共转染HepG2细胞,以pcDNA3与adwR9共转染为对照,荧光定量PCR检测培养上清液及胞内病毒量.结果HBV C基因截短对S蛋白的表达量没有影响,pHBV-ΔC与adwR9共转染组上清液和细胞内病毒量较对照组降低.结论C...
作者:赵虹; 杨子超; 张惊宇 期刊:《浙江大学学报·医学版》 2011年第06期
目的:针对小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)基因构建质粒并进行慢病毒包装,同时检测其表达水平和干扰效率,为进一步探讨该基因的功能提供研究工具和实验基础。方法:根据NMNAT1基因信息,用慢病毒载体pLenti6构建三种重组质粒,分别包含NMNAT1 cDNA全长、一个针对NMNAT1的小干扰序列和一个用于干扰对照的阴性序列。把这些质粒包装进慢病毒载体,并检测病毒滴度,再用慢病毒感染Hela细胞检测NMNAT1表达量和RNA干扰效率。结果:测...
作者:徐孙兵; 朱一平; 牟一平; 朱玲华 期刊:《浙江大学学报·医学版》 2012年第01期
目的:构建抗HIF-1α单靶位(anti-H)、抗Survivin单靶位(anti-S)以及抗HIF-1α和Survivin基因双靶位微小RNA表达载体(anti-H+S),观察和比较这3种载体对胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响。方法:设计4组靶向HIF-1α和Survivin基因的寡核苷酸序列,连接至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒,构建两组共8个载体,依次为anti-H(Ⅰ)、anti-H(Ⅱ)、anti-H(Ⅲ)、anti-H(Ⅳ)和anti-S(Ⅰ)、anti-S(Ⅱ)、anti-S(Ⅲ)、anti-S(Ⅳ)。实时定...
作者:高艳军; 杨清玲; 陈昌杰; 丁勇兴 期刊:《浙江大学学报·医学版》 2012年第05期
目的:构建pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察趋化因子受体4(chemokine receptor 4、CXCR4和CD184)与CXCR4抑制性多肽的相互作用。方法:应用化学合成法获得巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ(viralmacrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)N端21肽(N-terminal 21-mer peptide,NT21MP)编码的基因序列,克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VC155中,筛选含有目标基因...
作者:刘晓艳; 方红; 朱定仙; 张妤 期刊:《浙江大学学报·医学版》 2013年第01期
目的:模拟miR30的框架结构设计针对HPSE的shRNA,将其克隆至慢病毒载体的CMV启动子调控的表达框内,实现Ⅱ型启动子对RNAi的有效调控。方法:设计3条基于miR30骨架的HPSE—shRNA,通过PCR获得目的片段,回收后与线性化OVPP.GFP载体连接产生重组慢病毒载体LVPP—GFP/miR—HPSE—shRNA,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LVPP-GFP/miR.HPSE-shRNA、pHelper1.0载体和pHelper2.0载体共转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒,感染A375...
作者:王峰; 黄鹏; 刘主; 卢韵碧; 魏尔清; 张纬萍; 唐淳 期刊:《浙江大学学报·医学版》 2011年第02期
目的:制备和纯化重组人NAMPT和NAMPT(H247A)蛋白,并对其体外酶活性进行检测。方法:以pcDNA3.1-hnampt为模板,通过PCR扩增获得两端分别为BamHⅠ和NdeⅠ酶切位点的hnampt片断,将该片断与pET-11a(+)表达型载体连接,通过点突变获得pET-11a(+)-hnampt(H247A),以测序鉴定构建质粒。将野生型和突变型分别转化至BL21star大肠杆菌,以IPTG诱导蛋白表达,以镍柱和分子筛纯化目标蛋白,以SDS凝胶电泳和质谱鉴定目标蛋白,以核磁共振的方法检测两个...
作者:姚祺; 金雪; 胡天楠; 王启闻; 王训师; 胡奇达; 徐桑; 周峻; 汤谷平 期刊:《浙江大学学报·医学版》 2012年第06期
目的:对四种非病毒型聚阳离子载体材料的理化性质、体外细胞学及体内性质进行研究。方法:合成聚乙烯亚胺-环糊精(PEI-CyD)、聚乙烯亚胺-聚天冬酰胺(PEI-PHPA)和烷基胺-聚天冬酰胺(PEE-PHPA)等三种聚阳离子材料,用1H核磁共振对载体材料的结构进行确定;凝胶电泳实验研究了载体材料对质粒DNA的浓缩能力;粒径分析仪测定了载体材料结合DNA后的粒径及表面电荷。用MTT法在COS-7、A549、HEK-293和C6等细胞株上测定了四种载体材料的...
作者:翁炳焕; 徐威; 苏岚; 沈敏; 李蓉; 虞晓鹏; 李兰娟 期刊:《浙江大学学报·医学版》 2018年第05期
目的:研究羊水染色体核型分析质控细胞系的构建方法。方法:以T4DNA连接经BamHⅠ单酶切的SV40LTag-pcDNA和pcDNA3.1 (-) DNA,重组SV40LTag-pcDNA3.1(-)克隆,以脂质体介导法将重组克隆转染至染色体结构异常的羊水细胞,以G418筛选阳性克隆,观察细胞系的传代生长特性及其作为染色体核型分析质量评估的可行性。结果:构建了染色体核型为46,XY,t(8;19)(q24.3;q13.1)的羊水细胞系,传至第15代的细胞系经染色体核型分析,其核型与原代细胞一致...
作者:陆晓凤; 王良静; 周群燕; 姒健敏 期刊:《浙江大学学报·医学版》 2011年第01期
作者:刘青; 金岩; 吴织芬; 刘源; 邢向辉 期刊:《牙体牙髓牙周病学》 2005年第06期
目的:构建TRAF-6与绿色荧光蛋白融合的真核表达载体,为研究其在口腔疾病发病中的作用奠定基础.方法:应用基因重组技术,将反转录PCR得到的TRAF-6基因,克隆入荧光真核表达载体pEGFP-N3中,用含卡那霉素LB培养基平板筛选转化菌,阳性重组子经HindⅢ和KpnⅠ双酶切分析、PCR鉴定.重组质粒酶切鉴定正确后,以脂质体转染牙龈上皮细胞.分别由间接免疫荧光和免疫组织化学检测目的蛋白的表达.结果:获得的TRAF-6基因重组真核表达质粒,经间接免疫...
作者:蔡晓坤; 林菊生; 刘址忠; 谢娜; 梁扩寰 期刊:《中华肿瘤防治》 2005年第03期
目的:分别构建甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)启动子AF 0.3和AFP杂合启动子[HRE]AF调控的PNP基因表达载体,检测并分析两者的表达差异性.方法: 将AF 0.3和[HRE]AF启动子插入载体pcDNA 3.0中,构建肝癌特异表达载体pAF 0.3和p[HRE]AF;将PNP基因分别插入pAF 0.3和p[HRE]AF中,构建两启动子调控的PNP基因表达载体;通过酶切、PCR及测序鉴定各重组体.用脂质体介导法将两重组体转染不同细胞株,RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中表达,分析两者表达...