摘要：目的：构建抗HIF-1α单靶位（anti-H）、抗Survivin单靶位（anti-S）以及抗HIF-1α和Survivin基因双靶位微小RNA表达载体（anti-H＋S）,观察和比较这3种载体对胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响。方法：设计4组靶向HIF-1α和Survivin基因的寡核苷酸序列,连接至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒,构建两组共8个载体,依次为anti-H（Ⅰ）、anti-H（Ⅱ）、anti-H（Ⅲ）、anti-H（Ⅳ）和anti-S（Ⅰ）、anti-S（Ⅱ）、anti-S（Ⅲ）、anti-S（Ⅳ）。实时定量RT-PCR检测靶基因mRNA的表达水平,将两组中mRNA下调作用最强的质粒串联,构建anti-H＋S。用anti-H＋S及mRNA下调作用最强的anti-H和anti-S转染胰腺癌Panc-1细胞,Western blot测定靶蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖活性。结果：经测序鉴定,所有anti-H、anti-S及双靶位质粒anti-H＋S装载位点核苷酸序列与设计序列完全相符。anti-H的靶基因mRNA沉默效率依次为48%、2%、44%和30%;anti-S的靶基因mRNA沉默效率依次为72%、75%、58%和59%。由anti-H（Ⅰ）和anti-S（Ⅱ）串联得到双靶位质粒anti-H＋S。anti-H＋S的靶基因mRNA沉默效率为53%（HIF-1α）和42%（survivin）。anti-H（Ⅰ）、anti-S（Ⅱ）及anti-H＋S与对照质粒相比均使靶基因蛋白的表达明显下降,细胞增殖受到明显抑制（P〈0.05）。其中anti-H＋S对细胞的增殖抑制作用强于anti-H（Ⅰ）和anti-S（Ⅱ）,72h后差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：本研究成功构建了抗HIF-1α和Survivin的单靶位质粒和双靶位质粒;其中,anti-H＋S抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖作用强于anti-H（Ⅰ）和anti-S（Ⅱ）。

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