作者:张怀; 袁其朋; 朱亚平; 马润宇 期刊:《中国生物工程》 2005年第03期
为了在大肠杆菌中表达生产hepcidin,根据大肠杆菌密码子偏好性,化学合成了人hepcidin的基因序列,并构建了hepcidin的融合表达载体pET-hpc.pET-hpc在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的hepcidin融合蛋白以包涵体形式存在,其N端带有6个组氨酸.通过优化诱导表达条件,该融合蛋白表达水平显著提高,占总蛋白的25.2%.表达的包涵体经1%Triton X-100洗涤后溶于8mol/L尿素,在变性条件下采用金属螯合层析进行纯化,所得融合蛋白纯度大于95%.
作者:许文涛; 黄昆仑; 罗云波 期刊:《农业生物技术学报》 2004年第05期
bar基因来源于P3301质粒载体,通过构建PB813测序载体对bar基因进行了测序,与GenBank中bar基因全编码区比较发现:在DNA上有两个碱基不同,但在蛋白质水平上完全相同。用PCR方法从P3301载体上克隆了552碱基的bar基因全长序列插入到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET30a(+)中,构建了pET30a-bar融合表达载体并转人大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,pET30a-bar融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3...
作者:杨桦; 鲁润铭; 赵新艳; 林松; 刘桂芬; 毛艳斌; 张晓棠 期刊:《中国实用内科》 2005年第06期
汉坦病毒是分节段病毒,其基因组核酸由三段负链RNA组成,即大(L)、中(M)和小(S)3个片段.引起流行性出血热(HFRS).S片段编码核衣壳蛋白(NP),其在病毒颗粒中含量高,免疫原性强,是HFRS的理想诊断抗原.国内外对S基因分别在原核系统杆状病毒系统和痘苗病毒中进行了表达和初步应用[1,2].我国目前应用于临床情况,仍然缺少一种更为简便、敏感、特异性好的方法.本实验2002-06~2003-10应用PCR技术将S基因完整扩增,并将其与融合表达载体PGEX-6...
作者:臧晓南; 刘滨; 张学成; 茅云翔; 隋正红 期刊:《高技术通讯》 2005年第03期
采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法, 从牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑垂体总RNA中扩增出编码牙鲆生长素(GH)成熟肽基因序列.重组至融合表达载体pGEX-4T-3中,构建成牙鲆GH基因融合表达载体pGEX-gh, 转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE电泳显示在45kD处有特异的蛋白条带出现,该蛋白的表达量随诱导时间的延长而增加,3h达最高值,达到细胞总蛋白的18.3%.该融合蛋白在胞内主要以包涵体状态存在,经优化表...
作者:王文旭; 郁飞 期刊:《江苏农业科学》 2019年第08期
为进一步研究目的蛋白质在细胞内的定位,构建融合了红色荧光蛋白mCherry或mScarlet的表达载体。选取VTI12、RabD2a、ARA7以及SYP61等4个定位基因来构建红色荧光蛋白融合表达载体。根据TAIR数据库中相关蛋白质的基因序列设计引物,通过PCR技术扩增序列并将其分别连接到已制备好的红色荧光蛋白融合表达载体上,制备得到质粒后转化入原生质体进行瞬时表达。结果表明,成功构建了pUC18HE-NmCherry-VTI12、pUC18HE-NmCherry-RabD2a、pUC18-...
作者:张宏; 张艳玲; 侯平; 梁秀彬; 王海燕 期刊:《中华肾脏病》 2005年第04期
目的筛选与新基因AngRem104相互作用的蛋白,并验证AngRem104和Bardet-Biedl综合征2(BBS2)蛋白在哺乳动物细胞中的相互作用,为进一步研究AngRem104的生理功能奠定基础.方法构建AngRem104的酵母真核表达载体AngRem104-pGBKT7/c-myc,用以转化酵母菌AH109,并与转化了成人肾脏cDNA文库的酵母菌Y187接合,筛选与AngRem104相互作用的蛋白.从中挑选Bardet-Biedl综合征2蛋白进行免疫共沉淀,构建AngRem104-pcDNA3.1/V5-His和BBS2-pCMV/c-myc融...
作者:邢向辉; 金岩; 文玲英; 轩东英; 刘青; 杜岩 期刊:《牙体牙髓牙周病学》 2005年第02期
目的:从大鼠磨牙胚组织中克隆大鼠磨牙牙根发育相关基因mrp1,构建原核融合表达载体,利用大肠杆菌表达其C端肽.方法:从生后3 d SD大鼠仔鼠磨牙胚中提取总mRNA,通过RT-PCR扩增出mrp1C端肽段基因并克隆进中间载体,然后将插入基因克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1,以大肠杆菌DH5α为宿主菌,在28℃下进行IPTG诱导.结果:克隆载体序列酶切鉴定、序列测定完全正确;含重组质粒的工程菌经诱导后在SDS-PAGE上出现一条新生蛋白带,Mr为36×103,与预...
作者:羊正纲; 陈智; 徐宁; 倪勤; 潘修成; 金晗英; 李敏伟 期刊:《中华肝脏病》 2004年第09期
目的构建4个针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因序列的小发夹RNA(shRNA)表达载体,作用于增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HBV S基因融合表达载体,观察shRNA对融合蛋白的抑制作用,筛选出有效靶位.方法利用pAVU6+27质粒,设计并构建4个shRNA表达载体,与融合表达载体共转染AD293细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况并通过流式细胞仪分析shRNA对融合蛋白的抑制作用.同时,逆转录聚合酶链反应法验证其筛选的有效性.结果成功构建shRNA表达载体...
作者:郭寰宇; 董文博; 曲晓波; 史文婷; 郭焱 期刊:《现代生物医学进展》 2016年第23期
目的:构建鹿茸富脯氨酸多肽(APRP)基因融合表达载体,并诱导表达融合蛋白GST-APRP。方法:以鹿茸顶端组织总c DNA为模板,PCR方法扩增目的片段,连接p MDTM18-T载体,转化E.coli DH5α进行TA克隆。酶切与测序鉴定合格后,将目的片段与p GEX-6P-1质粒连接,完成p GEX-6P-1-APRP融合表达载体的构建。利用原核表达系统进行初步诱导表达。SDS-PAGE蛋白电泳检测蛋白表达情况。结果:PCR成功扩增出目的基因片段,目的基因片段大小为216 bp。提...
中国农业科学院生物技术研究所是“编码杀虫蛋白质融合基因和表达载体及其应用”专利(专利号CN95119563.8,以下简称单价基因专利)的原专利权人和“两种编码杀虫蛋白抽基因和双价融合表达载体及其应用”专利(专利号CN98102885.3,以下简称双价基因专利)的专利权人,1994年以来,我所与相关兄弟单位一直致力将上述单价基因导入棉花,对其后代进行筛选、鉴定,
作者:黄学勇 李永红 段广才 范清堂 郗园林 期刊:《广西医科大学学报》 2010年第05期
目的:克隆幽门螺杆菌外膜蛋白基因omp22,构建幽门螺杆菌omp22基因与麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体,并进行诱导表达,鉴定融合蛋白免疫原性,为幽门螺杆菌疫苗研究提供依据.方法:利用 PCR 技术从Helicobacter pylori郑州分离株MEL-Hp27染色体DNA上扩增omp22基因,并将其克隆到表达载体pMAL-c2X中,转化大肠杆菌(E.coli TB1),用IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,Western blot鉴定其免疫原性.结果:PCR方法扩增的omp...
作者:程琰 毛旭虎 王庆旭 余抒 刘艳青 张晓丽 宁亚蕾 邹全明 期刊:《免疫学》 2008年第06期
目的利用EspA(肠出血性大肠杆菌O157:H7Ⅲ型分泌蛋白A)作为融合伴体分子,构建一种高效原核融合表达载体。方法在EspA的羧基端设计一Linker,包括柔韧区,肠激酶酶切位点和多克隆位点。PCR分别扩增EspA、Linker基因,利用重叠延伸PCR技术获得二者融合基因,T-A克隆后插入表达载体pET-28a(+),构建高效原核表达载体-pEspA。分别将IL-24、GFP等六种基因克隆入pEspA,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE...