作者:杨恩; 陈少瑜; 张雨; 范志远; 习学良 期刊:《福建林业科技》 2005年第04期
以漾濞核桃中的大姚三台核桃为实验材料,通过对影响RAPD扩增结果的主要因子Tag酶、Mg+2、引物、模板DNA、dNTPs等不同的浓度和组合的试验研究,确定了漾濞核桃的最适反应体系和扩增程序,即在25μL反应体系中,0.75 u·L-1 Taq DNA聚合酶,3.0 mmol·L-1 Mg+2,0.3 mmol·L-1引物,含1.6 mg·L-1模板,2.5 ul 10×Buffer, dNTPs各0.2 mmol·L-1.扩增程序为:94℃预变性300 s,94℃变性40 s,36℃退火60 s,72℃链延伸120 s,45次循环后,72℃延伸600 s.
作者:董艳玲; 胡小平; 杨家荣; 苟建军 期刊:《西北植物学报》 2005年第06期
通过对苹果黑星病菌基因组DNA的SSR反应中一些重要参数进行优化,结果表明,最适反应体系为:25 μL体系中,10×Buffer(MgCl2 20 mmol/L)2.5 μL ,dNTP 100 μmol·L-1、引物0.5 μmol·L-1、Taq DNA聚合酶1.5 U,DNA模板 2 mg·L-1, dd H2O 19.5 μL.PCR扩增程序为93 ℃,2 min,57 ℃,30 s,1个循环;72 ℃,1 min, 93 ℃,30 s,57 ℃,30 s,40个循环;72 ℃,10 min.
作者:徐雯; 瞿印权; 韩笑; 何天友; 荣俊冬; 郑郁善 期刊:《生物技术通报》 2017年第08期
旨在建立绿竹ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序,并筛选适于绿竹ISSR-PCR分析的高多态性引物。以绿竹基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用正交试验方法,对d NTPs浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA用量设计5因素4水平试验,采用极差分析法和方差分析法对试验结果进行分析。并对退火温度和循环次数进行筛选,建立绿竹ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序。并利用优化后的体系对100条ISSR引物进行筛选。最终确定的最佳反应...
作者:吴涛 陈海云 陈少瑜 宁德鲁 冯丹 李勇杰 张艳丽 期刊:《西部林业科学》 2013年第02期
以文山、广西2个居群6个单株的八角嫩叶为研究材料,以八角叶片基因组DNA为模板,在分析归纳相关树种ISSR—PCR体系的基础上,确定一个反应体系并对ISSR引物库进行筛选,同时结合正交设计针对具体引物进行体系优化。结果表明,八角的ISSR—PCR反应体系(25μL)为DNA模板0.003~0.016ng,TaqDNA聚合酶0.5—1.0U,dNTPs0.2mmol·L-1,Mg2+浓度2.5—3.0mmol·L-1,引物浓度0.6—0.8μmol·L-1。扩增程序为,94℃预变性5min;94...
作者:张玉星 马艳芝 赵国芳 期刊:《中国农学通报》 2011年第06期
以雪花梨为材料,对ISSR反应体系中的模板用量、引物浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用量等一些重要参数进行探索和优化,初步建立了稳定的具有广泛适用性的梨属植物ISSR技术的反应体系及扩增程序,即20μL体系中含1×buffer(内含1.5mmol/LMgCl2)、模板DNA40~60ng、引物浓度为0.2μmol/L、dNTP200μmol/L、Taq DNA聚合酶1U。扩增程序为:94℃5min、退火60s、72℃延伸120s,然后连续39个循环为94℃60s、退火温度(52℃左右)60s、72℃延伸...
作者:张玉平 李丕军 朱燕 潘青华 鲁绍伟 李少宁 期刊:《中国农学通报》 2014年第13期
本研究主要对杨树RAPD体系进行优化,以银白杨为试材,利用L16(45)正交试验设计和2个单因素试验,研究各主要参数的适宜浓度。结果表明,杨树RAPD优化后的反应体系:20μL反应体系中,含Mg2+1.5 mmol/L、Taq酶2.0 U、引物0.2μmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、模板DNA 50 ng。扩增程序为:94℃预变性3 min、94℃变性40 s、38℃退火60 s、72℃延伸90 s,共38个循环;最后在72℃延伸7 min后4℃保温。通过1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物,证明...