摘要:以文山、广西2个居群6个单株的八角嫩叶为研究材料,以八角叶片基因组DNA为模板,在分析归纳相关树种ISSR—PCR体系的基础上,确定一个反应体系并对ISSR引物库进行筛选,同时结合正交设计针对具体引物进行体系优化。结果表明,八角的ISSR—PCR反应体系(25μL)为DNA模板0.003~0.016ng,TaqDNA聚合酶0.5—1.0U,dNTPs0.2mmol·L-1,Mg2+浓度2.5—3.0mmol·L-1,引物浓度0.6—0.8μmol·L-1。扩增程序为,94℃预变性5min;94℃变性30S,引物特异温度退火45S,72℃延伸1min,40个循环;72℃最后延伸7min;4℃保存。获得效果稳定并具有多态性的ISSR引物13条。研究结果可为八角遗传多样性分析和种质资源鉴定等研究奠定基础。
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