首页 期刊 西部林业科学 八角ISSR—PCR反应体系的建立及引物筛选研究 【正文】

八角ISSR—PCR反应体系的建立及引物筛选研究

作者:吴涛 陈海云 陈少瑜 宁德鲁 冯丹 李勇杰 张艳丽 云南省林业科学院 云南昆明650201 国家林业局重点开放性实验室云南珍稀濒特森林植物保护和繁育实验室 云南省森林植物培育与开发利用重点实验室 云南昆明650201
八角   反应体系   dna模板   扩增程序   引物筛选  

摘要:以文山、广西2个居群6个单株的八角嫩叶为研究材料,以八角叶片基因组DNA为模板,在分析归纳相关树种ISSR—PCR体系的基础上,确定一个反应体系并对ISSR引物库进行筛选,同时结合正交设计针对具体引物进行体系优化。结果表明,八角的ISSR—PCR反应体系(25μL)为DNA模板0.003~0.016ng,TaqDNA聚合酶0.5—1.0U,dNTPs0.2mmol·L-1,Mg2+浓度2.5—3.0mmol·L-1,引物浓度0.6—0.8μmol·L-1。扩增程序为,94℃预变性5min;94℃变性30S,引物特异温度退火45S,72℃延伸1min,40个循环;72℃最后延伸7min;4℃保存。获得效果稳定并具有多态性的ISSR引物13条。研究结果可为八角遗传多样性分析和种质资源鉴定等研究奠定基础。

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