首页 期刊 中国农学通报 梨属植物ISSR技术体系的建立与优化 【正文】

梨属植物ISSR技术体系的建立与优化

作者:张玉星 马艳芝 赵国芳 河北农业大学园艺学院河北省梨工程技术研究中心 河北保定071001 唐山师范学院生命科学系 河北唐山063000 北京金泰恒业有限责任公司富地分公司 北京100031
梨   issr   反应体系   扩增程序  

摘要:以雪花梨为材料,对ISSR反应体系中的模板用量、引物浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用量等一些重要参数进行探索和优化,初步建立了稳定的具有广泛适用性的梨属植物ISSR技术的反应体系及扩增程序,即20μL体系中含1×buffer(内含1.5mmol/LMgCl2)、模板DNA40~60ng、引物浓度为0.2μmol/L、dNTP200μmol/L、Taq DNA聚合酶1U。扩增程序为:94℃5min、退火60s、72℃延伸120s,然后连续39个循环为94℃60s、退火温度(52℃左右)60s、72℃延伸120s,完成最后1个循环后,在72℃继续延伸10min,然后在4℃保温,最后通过1.4%的琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物。

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