作者:袁如意; 马雪婷; 殷昊; 龚振兴; 杨顺利; 曲自刚; 韩政岚; 刘保红; 刘晓丽; 蔡建平 期刊:《中国兽医学报》 2018年第09期
为了克隆表达纯化鸡颗粒溶素(chicken granulysin,ChGNLY)并进行活力鉴定。本试验以基因组数据库预测的ChGNLY基因为模板设计引物,对提取的鸡脾脏总RNA进行RT-PCR,扩增得到的ChGNLY基因插入pMD-19T载体中并测序。将测序正确的GNLY基因克隆至pGEX-6p-1,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GNLY,并将其转化至感受态BL21,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE、Western-blotting和蛋白质谱鉴定融合蛋白的正确性。CellTiter-Glo2.0Assay检测融合...
作者:缪家文; 李芳秋; 杨爱龙; 张春华 期刊:《医学研究生学报》 2005年第12期
作者:杨春(综述); 朱道银(审校) 期刊:《微生物与感染》 2005年第05期
颗粒溶素是人类自然杀伤细胞和细胞毒性T淋巴细胞胞质颗粒中的可溶性分子,是一种天然的抗菌肽,具有抗病原微生物、抗肿瘤等多种生物活性.本文就颗粒溶素的溶菌机制,抗微生物、抗肿瘤作用及评估细胞免疫等方面的研究进展及其应用作一综述.
作者:高娟; 彭裕萍; 张昌明; 柳林整; 申江江 期刊: 2018年第14期
作者:周晔; 邓安梅; 谷明莉; 冻燕; 陈波; 陈孙孝; 仲人前 期刊:《中国实验诊断学》 2010年第01期
目的研究颗粒酶B(grmazymeB,GrB)、颗粒溶素(granulysin,GNLY)及穿孔素(pefforin,又称pore-formingpro—tein,PFP)三种免疫效应分子在隐球菌性脑膜炎(cryptococcalmeningitis)外周血单个核细胞中的表达及其临床意义。方法首先用密度梯度离心法分离得到25例隐球菌性脑膜炎患者和30例健康人外周血单个核细胞(peripheral blood monotmclearcells,PBMC),其次用免疫印迹(western blot)的方法检测其中的GrB、GNLY、及P...
作者:钱琤; 陈波; 周晔; 谷明莉; 蒋廷旺; 吴传勇; 陈燕; 邓安梅; 仲人前 期刊:《检验医学》 2007年第03期
目的应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测乙型肝炎(简称乙肝)患者外周血单个核细胞(PBMC)中颗粒溶素(GNLY)mRNA的表达,探讨GNLY基因表达水平与急性乙肝的关系。方法实时荧光定量RT-PCR分别检测40例急性乙肝患者及100名正常对照的PBMC的GNLY基因表达水平,同时检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。结果急性乙肝患者发病期mRNA表达显著高于正常对照组(P〈0.01),恢复期GNLY基因表...
作者:钱王争; 姚定康; 吴传勇; 蒋廷旺; 陈波; 周晔; 王燕; 邓安梅; 仲人前 期刊:《中华检验医学》 2007年第04期
目的研究颗粒溶素(granulysin,GNLY)、颗粒酶B(granzymeB,GrB)及穿孔素(perforin,PF)三种免疫效应分子在原发性胆汁性肝硬化(primarybiliarycirrhosis,PBC)外周血中的表达并探讨其与PBC的关系。方法以正常健康人和肝炎后肝硬化患者为对照,用实时荧光定量RT—PCR方法检测PBC患者PBMC中GNLY、GrB及PFmRNA的含量。用ELISA方法检测PBC患者血清中GNLY表达情况并分析其与肝功能的相关性。结果PBC组GNLY、GrBmRNA平均拷贝数...
作者:何永林; 朱道银; 伊正君; 杨春; 徐蕾 期刊:《医学争鸣》 2006年第18期
目的:构建能分泌表达人9ku颗粒溶素(granulysin)的真核质粒,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础.方法:以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,通过PCR,双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定;采用RT—PCR,免疫细胞化学与Dot—ELISA法检测pBudCE4.1-S9K在RAW...
作者:陈燕; 周晔; 钱琤; 蒋廷旺; 吴传勇; 陈孙孝; 邓安梅; 仲人前 期刊:《上海医学》 2007年第07期
目的 采用基因工程方法重组并表达颗粒溶素融合蛋白.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)克隆颗粒溶素多肽分子的cDNA,经测序证实后定向插入表达载体pET28a(+),并经双酶切电泳鉴定.进而导入大肠杆菌BL21(DE3)plyS中,经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组融合蛋白.结果 经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western印迹法鉴定,在相对分子质量为9 000处有明显的条带.结论 经重组表达获得颗粒溶素融合蛋白,有助于...
作者:陈燕; 娄加陶; 钱琤; 周晔; 陈波; 蒋天舒; 谷明莉; 仲人前; 邓安梅 期刊:《临床军医》 2007年第02期
目的 探讨低剂量颗粒溶素(GNLY)对免疫细胞的趋化作用。方法 抽取健康人全血。分离出外周血单个核细胞(PBMC),经免疫磁珠法纯化出单核细胞、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、CD4^+/CD45RA^+T细胞、CD4^+/CD45RO^+T细胞、CD8^+/CD45RA^+T细胞和CD8^+/CD45RO^+T细胞。再用96孔微孔趋化板进行趋化反应。结果颗粒溶素可趋化一些T细胞系、单核细胞系。趋化指数I〉2(P〈0.05),而对B细胞系的趋化指数为〈2。用百日咳毒素...
作者:张黎; 伊正君; 杨春; 何永林; 朱道银 期刊:《国际生物制品学》 2007年第06期
目的全面研究Mr9000人颗粒溶素(GLS)的生物学活性.为其作为生物治疗剂应用奠定基础。方法将含Mr9000GLS编码基因的pZM03质粒转染肝癌细胞株SMMC-7721,通过MTT实验、流式细胞仪、Hoechst染色法检测GLS的致肿瘤细胞凋亡活性;将pZM03转染已感染结核分枝杆菌毒力株H37Rv的RAW264.7细胞,96h后裂解细胞作细菌培养及菌落计数,检测GLS的细胞内直接杀菌活性。结果将pZM03质粒转染SMMC-7721细胞后,从多个角度检测到了GLS的致肿瘤细...
作者:钱琤; 陈孙孝; 周晔; 王燕; 谷明莉; 陈波; 陈燕; 邓安梅; 仲人前 期刊:《第二军医大学学报》 2006年第08期
目的:采用原核表达系统对颗粒溶素(granulysin,GNLY)进行体外表达,纯化及活性鉴定。方法:以体外培养的人外周血单个核细胞(PBMC)为模板,RT-PCR扩增编码GNLY的cDN段,插入pMD-18-T载体,测序正确后再亚克隆到质粒pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)-GNLY,转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达融合蛋白,包涵体经变复性后用Ni亲和层析纯化,CFU法测定蛋白活性。结果:成功地将GNLY cDN段插入载体pET28a...
作者:钱琤; 陈孙孝; 周晔; 陈波; 蒋廷旺; 吴传勇; 邓安梅; 仲人前 期刊:《中国免疫学》 2007年第02期
目的:通过建立荧光定量RT-PCR的方法,检测颗粒溶素(Granulysin,GNLY)mRNA在人外周血单个核细胞(PBMCs)中基因表达的水平.方法:基于TaqMan荧光探针技术,构建克隆载体pMD18-T-GNLY,建立荧光定量RT-PCR方法,并检测了40名正常健康献血者外周血中GNLY的表达水平.结果:内参18 S rRNA的动态检测范围为10^3~10^8拷贝/μg RNA;而40名正常健康人外周血的PBMCs中均有GNLY mRNA的表达,范围为3.12×10^6~4.32×10^7拷贝/μg RNA,均值为[(2...
作者:王伟灵(综述); 柯金山(综述); 舒志军(审校); 何善述(审校) 期刊:《国际检验医学》 2006年第05期
颗粒溶素(GRA)是NK细胞和CTL细胞胞浆颗粒中的一种蛋白质分子,具有广泛的杀菌、杀病毒、杀伤肿瘤细胞的活性。通过对GRA的结构、功能及与临床关系的研究,探究其对靶细胞的杀伤机制、在微生物免疫中的作用及其与感染性疾病、肿瘤及其他疾病的相关性,均表明其具有广泛潜在的临床应用价值。
作者:何永林; 张黎; 朱道银; 伊正君; 杨春; 徐蕾 期刊:《中国人兽共患病学报》 2007年第05期
目的构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,通过PCR、双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定;采用RT-PCR,免疫细胞化学与Dot-ELISA法检测pBudCE4....
作者:陈燕; 周晔; 钱琤; 蒋廷旺; 吴传勇; 陈孙孝; 邓安梅; 仲人前 期刊:《临床检验》 2006年第05期
目的研究急性乙型肝炎患者外周血颗粒溶素的表达及其意义。方法收集确诊急性乙型病性毒肝炎患者、无症状乙肝病毒(HBV)携带者和体检健康者全血,分离外周血单个核细胞(PBMC),抽提总RNA,采用MGB探针,以18s RNA为内参,经荧光定量PCR(FQ—PCR)方法,检测其颗粒溶素mRNA的表达水平。对照组为90例体检健康者和90例无症状HBV携带者。结果急性期乙肝患者PBMC颗粒溶素表达水平(拷贝/μg)(2.8±3.1)×10^9显著高于体检健康者...
作者:伊正君; 朱道银; 李俊明; 杨健; 何永林; 曾伟; 李娜 期刊:《细胞与分子免疫学》 2006年第01期
目的:构建编码活化的人细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表达的天然颗粒溶素(granulysin,GLS)基因的真核表达载体pBudCE4.1/GLS.并转染不同种系来源的小鼠腹腔巨噬细胞。观察GLS在其中的表达及其可能的致细胞损伤与诱导凋亡的作用:方法:将人GLS的编码序列从pEGFP—C1/GLS质梳亚克隆入pBudCE4.1真核表达载体中,鉴定正确后转染不同种系来源的小鼠腹腔巨噬细胞。采用RT—PCR及免疫细胞化学染色法检测GLS的表达:通过测定转染细胞培...
作者:杨春; 王渝伟; 伊正君; 何永林; 李娜; 徐蕾; 张黎; 朱道银 期刊:《中华结核和呼吸》 2007年第02期
目的 探讨携带编码人天然颗粒溶素和小鼠白细胞介素12(IL-12)基因质粒(pZM03)的重组耻垢分枝杆菌对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法 结核分枝杆菌H37Rv感染Balb/c小鼠4周后,分别用生理盐水、耻垢分枝杆菌、pZM03、重组耻垢分枝杆菌治疗6次,于第1次治疗后3个月处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞γ干扰素的分泌水平、血清IL-12和IgG2a分泌水平和肺、脾组织中颗粒溶素表达,同时观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果 ...
作者:黄建华; 农雪萍; 雷建平; 万引; 陈艳玲 期刊:《江西医药》 2016年第07期
目的研究探讨化疗和卡介苗免疫对结核病小鼠T淋巴细胞亚群内穿孔素和颗粒溶素表达的影响。方法按体重相近的原则将90只体重(19±1)g,属龄(7±1)个月实验用C57 BL/6小鼠随机分成6组:(1)健康对照组15只(A组);(2)结核病对照组15只(B组);(3)卡介苗免疫组15只(C组);(4)卡介苗免疫成功后结核菌攻击组15只(D组);(5)结核病化疗组15只(E组);(6)结核病化疗1个月后加卡介苗免疫治疗组15只(F组)。分别进行相应的实...