作者:王丽; 杨文理; 龚舒; 梅志强; 何涛 期刊:《西南医科大学学报》 2010年第01期
目的:利用重叠延伸PCR技术纠正人工合成乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因中的突变碱基。方法:针对构建的重组质粒PGEM-7Z/HBcAg中的两处突变设计三对引物,PCR定点突变后对重新构建的PGEM-7Z/HBcAg进行菌落PCR和酶切鉴定,初步筛选的阳性克隆进一步通过序列分析进行确证。结果:经PCR定点突变后,测序证明HBcAg基因序列与设计完全一致。结论:用该方法成功纠正了人工合成的乙肝病毒核心抗原基因中两个碱基的缺失,获得了预期...
作者:开丽霞; 刘安康; 朱贵坤; 肖正泮; 韦双双; 王大勇; 裴业春 期刊:《热带医学》 2017年第10期
目的将多克隆酶切位点MCS插入乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的loop区,构建乙肝病毒核心抗原展示载体。方法将多克隆酶切位点MCS插入到HBcAg的c/e1 loop区,取代了HBcAg c/e1 loop区的Pro79与Ala80氨基酸残基,成功构建了pET28a-HBcAg-MCS原核表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,利用不同IPTG浓度梯度进行原核诱导表达与NI-NTA亲和层析纯化,利用SDS-PAGE电泳和透射电镜检测。结果成功表达了HBcAg-MCS融合蛋白,且最佳的IPTG诱导浓...
1、何来HBeAg?乙型肝炎病毒(HBV)的最外层叫做HBV外膜,就是乙肝病毒表面抗原(HBsAg),HBV的核心部分就是乙肝病毒核酸(HBVDNA),在HBVDNA和HBsAg之间还有一层结构叫做“核壳体”,它是包裹着HBV核酸的“壳儿”,它就是HBV核壳蛋白,共有两种,一种是结构性蛋白,也可称为乙肝病毒核心抗原(HBcAg),另一种是分泌性可溶性蛋白,就是HBeAg,二者组成了HBV的核心蛋白。
作者:裴业春; 安晓荣; 侯健; 陈永福; 闫凤祥; 关宏; 韦双双; 王大勇 期刊:《中国畜牧兽医》 2016年第11期
为将猫重组变应原Fel d 1蛋白展示在乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒的表面,本试验将编码Fel d 1蛋白的两个基因chain1和chain2拼接在一起形成重组Fel d 1(rFel d 1),然后插入到HBcAg的c/e1loop区,取代HBcAg c/e1loop区的D78与E83之间的氨基酸。经密码子优化后进行全基因合成,成功构建了pET28aHBcAg-rFel d 1原核表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核诱导表达与Ni-NTA亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE电泳、Weste...
通过肝穿刺取肝的活组织进行病理学检查(俗称"肝穿"),是了解肝脏病变情况最直接、最准确的一种方法,因此通过这种方法检查出来的结果被认为是诊断各种肝病的"金标准"。尤其是一些慢性肝炎患者,当他们通过验血、
作者:王丽 龚舒 段承刚 李娟 何涛 期刊:《泸州医学院学报》 2009年第04期
目的:构建乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的融合表达质粒并在原核系统表达,为治疗性疫苗的研制奠定基础。方法:根据大肠杆菌偏爱密码子,利用Synthetic Gene Designer软件对HBcAg基因进行密码子优化,分成24条长约40bp寡核苷酸片段,将重叠PCR合成的HBcAg基因插入到pET30a中,经限制性核酸内切酶酶切鉴定和核酸序列分析无误后转化BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达情况。结果:酶切和测序鉴定表明,成功构...
作者:赵秀华 张景遥 王晓花 张照华 陈士俊 期刊:《预防医学论坛》 2009年第11期
[目的]探讨乙肝患者精细胞内HBcAg表达与血清HBVDNA水平的相关性及拉米夫定对精细胞内HBcAg表达的抑制作用。[方法]选择2007年1月至2008年10月在济南市传染病医院就诊的门诊和住院的乙肝患者62例为乙肝组,22名HBV指标全部阴性的健康人为对照组,检测精细胞内的HBcAg;乙肝组同时检测血清HBVDNA。[结果]精细胞HBcAg定性检测阳性率,乙肝组为96.77%(SHBc1≤2.5者7例。2.6~4.9者18例,≥5者37例)。22名健康对照均阴性。乙肝...
作者:刘小娟 王永山 欧阳伟 张海彬 王忠灿 唐雨德 期刊:《中国预防兽医学报》 2010年第11期
为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位基因5epis的免疫效力,本研究应用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的231位~232位核苷酸(77位~78位氨基酸残基)之间插入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,构建基于HBcAg修饰基因(mHBc)的抗原表位嵌合体基因分子载体pET-mHBc。将编码IBDV多表位基因5epis定向插入到pET-mHBc的mHBc基因中,获得嵌合体基因mHBc-5epis表达重组质粒pET-mHBc-5epis,并在大肠杆菌中表达。经SDS-PAGE...
作者:陈小华 潘庆春 汤正好 余永胜 臧国庆 期刊:《世界华人消化》 2009年第29期
目的:探讨经PTD-HBcAg融合蛋白体内诱导的特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对HBV转基因小鼠病毒的抑制作用.方法:20只HBV转基因小鼠随机分组,融合蛋白PTD-HBcAg及对照蛋白HBcAg经皮下免疫小鼠,每周1次,共3次.流式细胞仪检测脾细胞中胞内细胞因子水平;微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBVDNA水平;肝脏HE染色及免疫组织化学方法检测HBsAg表达.结果:PTD-HBcAg融合...
作者:盛慧萍 杨岩 赖雅芳 刘娅 张栩 秦王景 期刊:《山东医药》 2010年第07期
目的探讨肝组织HBV cccDNA定量对慢性乙型肝炎(乙肝)患者病情的影响。方法应用FQ—PRC法检测42例乙肝患者肝组织HBVcecDNA、肝组织和血清HBV—DNA水平,同时对肝组织行常规病理染色判断肝组织炎症及纤维化程度;SP法检测肝组织中HBsAg、HBcAg表达,化学发光法检测HBV标志物。分析肝组织HBVceeDNA与组织和血清HBV-DNA、肝细胞内HBsAg、HBcAg水平及肝脏炎症、纤维化程度的关系。结果肝组织HBVeecDNA定量与组织及血清HBV—DNA定量呈...
作者:蒋蓉 李军强 杨鸣鸣 朱涛 宇学锋 邵忠琦 期刊:《中国免疫学》 2016年第03期
目的:构建乙肝病毒核心抗原(HBcAg)与人乳头瘤病毒(HPV)L2抗原的融合蛋白,在大肠杆菌中重组表达形成病毒样颗粒结构;通过小鼠模型检测HBc-L2融合蛋白的免疫原性,并研究免疫后获得的小鼠血清对HPV假病毒的中和效力。方法:通过DNA合成构建16型人乳头瘤病毒L2基因片段与HBcAg基因的融合基因,将其克隆至表达载体p ET9a并在大肠杆菌中进行HBc-L2融合蛋白表达;将经纯化、鉴定后的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测小鼠血...