作者:连敏; 叶燕青; 汪甜; 刘冰 期刊:《生物资源》 2014年第01期
探讨新生大鼠肺成纤维细胞原代培养的改良方法及细胞鉴定.用胰酶消化组织块结合的方法提取新生大鼠肺成纤维细胞,并纯化细胞,对肺成纤维细胞进行形态学观察,用HE染色及免疫组化染色法对细胞进行鉴定,并用MTT法测定细胞生长曲线.倒置相差显微镜下观察选用改良法获得的细胞,3d后可见组织块周边有少许细胞,5d后组织块周围有大量细胞爬出,生长迅速,10d接近融合.经改良后的方法纯化细胞,细胞活性状态较好的为3~5代,5代以后的细胞增殖能...
作者:周晨阳; 陈忠; 辛毅; 杨燎; 王盛; 唐小斌; 成伟; 刘丹 期刊:《心肺血管病》 2013年第03期
目的:探索并建立兔内皮祖细胞(EPCs)的体外培养、鉴定方法。方法:采用密度梯度分离法分别从兔外周血和骨髓中分离出单个核细胞,接种于预包被明胶的培养瓶,并应用培养基(EBM-2)诱导培养,诱导分化为EPCs;在倒置显微镜下观察两种源性细胞生长过程;台盼蓝法测定细胞传代成活率;通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测比较两种源性获得的EPCs增殖情况;采用免疫荧光染色观察EPCs相关抗原CD34、CD31、CD133及vWF因子的表达。结果:...
作者:史慧敏; 徐军全; 王登妮; 王明亮; 宋彬妤 期刊:《中国医药导报》 2010年第14期
目的:探讨一种经济易行的分离与培养大鼠肝星状细胞的方法,为研究肝纤维化的发病机制提供良好条件。方法:采用离体循环酶液灌注法对成年大鼠的肝脏进行消化,经两种密度的Nycodenze密度梯度液高速离心(20000r/min)和细胞悬液低速离心(40×g)去杂质后得到肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活率,desmin和GFAP免疫细胞化学双抗单染色法鉴定肝星状细胞的纯度。结果:肝星状细胞的得率为(3.6±0.1)×10^7/肝,肝星状细胞存活率为(...
作者:刘倚帆; 谭秀文; 游伟; 张相伦; 姜富贵; 宋恩亮; 万发春 期刊:《动物营养学报》 2019年第05期
本试验旨在建立肉用杂交犊牛小肠上皮细胞分离培养和鉴定的方法,为研究犊牛小肠上皮细胞营养吸收、免疫调控及肠道屏障功能提供原代细胞培养模型。选用新生未吮乳的肉用杂交犊牛的空肠组织,应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化法对小肠上皮细胞进行分离,应用相差消化法和相差贴壁法对犊牛小肠上皮细胞进行纯化。通过细胞形态学观察、生长曲线、免疫荧光及染色体核型分析等方法来鉴定细胞。结果表明:1)应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化法得到...
作者:王亚妮; 刘先宁; 王小东; 高伟; 银勇; 朱秀萍 期刊:《中华实验眼科》 2019年第02期
作者:王静; 蔡霞; 王志国; 徐全臣; 李坤; 华骋 期刊:《中国组织工程研究》 2019年第17期
背景:脂肪间充质干细胞是重要的种子细胞之一,可通过较简单的方法大量提取,但其储存条件较苛刻,运输不便,临床应用较困难。外泌体可由脂肪间充质干细胞分泌,其结构稳定,不易分解,为脂肪间充质干细胞在临床应用提供了新的可能性。目的:提取人脂肪间充质干细胞,鉴定脂肪间充质干细胞,诱导脂肪间充质干细胞多向分化,提取脂肪间充质干细胞来源的外泌体,鉴定脂肪间充质干细胞来源的外泌体。方法:收集青岛大学附属医院医学美容中心的正常...
作者:刘亭; 姜翙; 刘志华; 孙宁; 李晓媚; 翁锦生 期刊:《中国组织工程研究》 2018年第29期
背景:目前大多数报道是从新鲜脐带中分离培养脐带间充质干细胞,而从冻存脐带组织中分离培养间充质干细胞鲜有报道。目的:从冻存人脐带中分离培养间充质干细胞,并比较多种培养方法获得的脐带间充质干细胞的生物学特性。方法:采用组织块贴壁法从冻存脐带组织中分离培养脐带间充质干细胞,分别用有血清和无血清培养基培养,观察其形态特征,绘制其生长曲线;流式细胞仪检测第3代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)和第14代脐带间充质干细...
作者:王哲; 许汉鹏; 王全平; 张俊华; 李明全; 雷伟; 罗卓荆 期刊:《中国脊柱脊髓》 2004年第04期
目的:探讨黄韧带退变的发生机理.方法:采用组织块培养法,体外培养正常黄韧带和退变性黄韧带细胞,并进行细胞化学、免疫细胞化学等方面研究.结果:黄韧带细胞可以在体外增殖和传代,退变性黄韧带细胞呈现出某些成骨细胞表型特征,而正常黄韧带细胞主要为成纤维细胞表型.结论:退变黄韧带中存在大量具备某些成骨细胞表型特征的细胞,其中包括软骨细胞,它们可能被骨形成蛋白等骨生长因子所调控.
作者:陈世钻; 俞富祥; 陈俊予; 唐银河 期刊:《温州医科大学学报》 2019年第09期
目的:探究大鼠肝细胞、肝窦内皮细胞的分离培养方法及肝去细胞支架的制备方法。方法:用胶原酶IV消化肝脏组织后经洗涤、过滤、离心等步骤分离出大鼠肝细胞,然后置于培养基内进行纯化、培养后行细胞免疫组织化学检测;通过Percoll密度梯度离心法分离出肝窦内皮细胞置于培养基内纯化、培养后行免疫荧光检测;肝组织经循环灌注去细胞处理制备成大鼠肝细胞去细胞支架后经扫描电镜证实。结果:分离出的大鼠肝细胞在显微镜下呈光亮圆形,饱满...
作者:张峤; 郝少欢; 吴梅; 帕提古丽·阿尔西丁 期刊:《新疆医科大学学报》 2018年第08期
目的探索人非小细胞肺癌血管内皮细胞(HNSCLC-MECs)的培养方法,观察细胞生长状态并鉴定。方法收集外科非小细胞肺癌手术组织标本,研磨至匀浆经钢筛网过滤收集沉淀,短时少量胰酶消化后组织块贴服培养。根据细胞差速粘附的原理对细胞进行纯化和传代。结果原代培养60h后可见少量细胞贴壁生长,7d后贴壁细胞明显增多,传代后10d单层细胞呈典型"铺路石"样改变。应用激光共聚焦显微镜可见FactorⅧ及CD34抗体表达于细胞膜上,表达阳性率...
作者:冯力; 于如同; 王婷; 董红艳; 燕景风; 孔令胜 期刊:《临床神经外科》 2005年第03期
目的 体外培养并鉴定神经干细胞,为相关实验研究奠定基础.方法 分离SD大鼠胎鼠的间脑,加入神经生长因子EGF和bFGF在神经干细胞条件培养基中克隆培养.用免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞.结果 分离培养的细胞具有不断增殖的能力,表达神经巢蛋白(nestin),并能经过诱导分化为神经元和神经胶质细胞.结论 成功建立了神经干细胞的分离培养方法,可用于进一步的实验研究.
作者:宋学琴; 李春岩; 吴淑玉; 王丽琴; 王晓娟 期刊:《基础医学与临床》 2004年第01期
本实验建立了体外胚胎大鼠脊髓运动神经元的分离培养,并进行鉴定.取孕15dSD大鼠胚胎的脊髓腹侧组织,用胰蛋白酶和胶原酶消化分离成单细胞悬液,进行原代细胞培养,应用神经元特异性的烯醇化酶(NSE)抗体和抗神经微丝抗体-SMI32单克隆抗体对培养细胞进行鉴定,同时行尼氏染色.结果分离培养的细胞鉴定为脊髓运动神经元(SMN),SMN在体外适宜的条件下可存活4周左右,可作为神经科学研究的一种手段.
作者:胡梅新; 刘家乐; 陈宣伯; 徐安琪; 舒松仁; 汪潮湖; 刘忆 期刊:《南方医科大学学报》 2018年第03期
目的培养稳定的恶性脑膜瘤原代细胞以及建立颅内原位成瘤模型。方法改良法培养术前高度可疑恶性脑膜瘤原代细胞,稳定传代后细胞免疫荧光鉴定;将细胞用立体定向仪接种于6只裸鼠大脑右侧顶叶,同时用注射器种植于6只裸鼠皮下;6周后处死裸鼠,HE染色和免疫组化检测肿瘤的增殖以及对周边脑组织的侵犯。结果成功培养并稳定传代恶性脑膜瘤原代细胞(术后病理:间变型恶性脑膜瘤),细胞免疫荧光检测Vimentin(+)和EMA(+),生长曲线呈"S...
作者:陈阳洁; 高柯欣; 王智豪; 李峰; 张琳琳; 刘娇; 陈晓光 期刊: 2019年第04期
为分离、培养高纯度原代小鼠肝实质细胞,并鉴定其纯度及生物活性,试验采用原位两步循环灌流法及多次低速差速离心法分离纯化肝实质细胞,促贴壁培养基原代培养,台盼蓝检测其存活率,PAS反应检测其糖原合成能力,免疫荧光化学检测细胞中CK18表达情况。结果表明:每只小鼠可获取约1.5×10^6个细胞,存活率>97%;镜下发现细胞在接种后6h开始贴壁,72h贴壁细胞生长状态良好,胞体变大、不规则,细胞间相互靠拢呈岛状或条索状连接;肝细胞出现成片...
作者:谢华福; 刘晓燕; 何涛; 余鸿; 刘广益 期刊:《四川解剖学》 2004年第01期
长期以来,Guguen等[1]的两步胶原酶灌注法分离获得肝细胞的方法,几乎成了肝细胞分离的经典方法;在此基础上又发展了多种不同的培养方法,如在培养瓶内加纤连蛋白(febronectin)以促进肝细胞附壁[2],添加生长因子于培养基促其生长等.但上述方法步骤繁琐,成本较高,且两步胶原酶灌注法主用于大鼠肝细胞的分离,不适于新生鼠肝细胞的分离,甚至分离成年小鼠肝细胞,都因为血管的纤细,在实际应用中也很困难.
作者:宋玮; 赵守亮; 石勇; 何文喜 期刊:《牙体牙髓牙周病学》 2005年第02期
目的:分离并鉴定完整的成熟人成牙本质细胞.方法:收集人健康恒牙,采用胶原酶和蛋白酶联合消化法分离出成牙本质细胞,并对分离出的细胞进行细胞形态学和免疫组织化学鉴定. 结果:实验分离出的细胞为柱状或立方状,有较长的细胞突起,具有典型的成牙本质细胞形态,免疫组化染色显示细胞表达Ⅰ型胶原、DMP1和DSP蛋白.结论:本研究分离得到了完整的成熟人成牙本质细胞,为后期研究成牙本质细胞的分化、功能及特点奠定基础.
作者:高俊玮; 伍军; 柳浩然; 陈长青; 方芳; 周向阳; 方加胜 期刊:《中国神经精神疾病》 2005年第05期
目的利用无血清培养和细胞克隆培养技术从孕鼠(14 d)胚胎中分离出神经干细胞,并进行传代培养和诱导分化.方法采用免疫细胞荧光化学染色方法观察不同代数细胞克隆球中nestin、neuN、GFAP阳性细胞比例,鉴定培养的原代和传代的细胞类型.结果随着传代次数增加,克隆球中nestin阳性细胞的比例无明显变化(P>0.05),不同代数的神经干细胞克隆球诱导分化后均有一定比例的neuN与GFAP阳性细胞.结论证实从胚胎大鼠大脑皮层分离培养的细胞是神经...
作者:张玉; 周曦; 易龙; 马鑫; 张乾勇; 糜漫天 期刊:《局解手术学》 2018年第01期
目的改进大鼠肝星状细胞(HSC)的分离、纯化方法,为肝相关疾病研究提供稳定细胞来源。方法采用严格控制灌注液温度、流速及灌注时间的肝逆向两步酶灌注法进行原位组织消化,并使用Pronase E/CollagenaseⅣ联合消化液体外消化肝组织,进而用Percoll密度梯度离心分离HSC细胞;台盼蓝拒染实验检测细胞存活率,CCK-8法测定细胞活力并制作细胞生长曲线;分别采用流式细胞术及免疫荧光细胞化学法对HSC细胞进行鉴定。结果采用改良方法后,每只...
作者:任宇; 马玉珍; 王清莲; 刘东军; 仓明; 温建勋; 靳木子 期刊:《畜牧与兽医》 2011年第05期
本研究旨在观察不同代次骨髓间充质干细胞(BMSCs)和脂肪间充质干细胞(ADSCs)体外培养的生长特点和体外诱导成骨能力。通过密度梯度离心和贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞,用含地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠的培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化,并利用茜素红染色、碱性磷酸酶染色及PCR方法检测成骨细胞。结果表明骨髓及脂肪间充质干细胞呈成纤维细胞样生长,增殖能力强,生长迅速。第5、10...
作者:陈金武; 吴军正; 张军; 李焰; 刘斌 期刊:《现代口腔医学》 2004年第02期
目的分离培养并鉴定人胚胎骨髓基质干细胞.方法抽取流产胎儿股骨骨髓,Percoll离心纯化分离,取界面有核细胞培养.不同培养基培养对比,观察细胞生长曲线,免疫细胞化学鉴定细胞膜表面分子.结果得到纯化率较高的骨髓基质干细胞(MSCs),用αMED比DMEM和RPMI1640原代培养生长速度快,第二代MSCs在上述三种培养基中倍增时间分别为43h、54h、56h.免疫细胞化学结果99%CD44(+)、98%Vim(+)、所有细胞CD34(-)、CD29(-).结论Percoll离心法成功地分...