作者:王丽; 张永亮; 何涛; 李娟; 刘晓燕 期刊:《西南医科大学学报》 2010年第04期
目的:寻找一种适合乳腺癌细胞MCF-7蛋白提取的裂解液配方用于免疫印迹分析。方法:配制两种不同的细胞裂解液A与B,分别对培养的密度相当的人乳腺癌细胞MCF-7进行总蛋白的提取,Bradford法测蛋白含量,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白进行分离,免疫印迹法检测β-actin和Twist的表达,比较2种裂解液裂解效果。结果:2种细胞裂解液均可满足免疫印迹分析的要求,B液提取的蛋白含量虽比A液高,但A液用于免疫印迹检测β-actin和Twist的效...
作者:傅静奕; 李焱; 严励; 张淼; 陈黎红; 傅祖植 期刊:《中国组织工程研究》 2005年第15期
目的:观察甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的β细胞(RIN-m细胞)凋亡是否具有保护作用,并与普通胰岛素及胰岛素样生长因子1的干预效果进行对比.方法:本实验于2004-05/2004-10在中山大学附属第二医院林百欣医学科学研究中心完成.RIN-m细胞被培养并常规培养传代.诱导凋亡接种于6孔板或者96孔板后常规培养2 d,待细胞长至70%满左右时,吸去培养基,加入含10 g/L血清白蛋白,10 mL/L乙醇,20 mL/L胎牛血清的培养基(正常对照组),或者含10 g/L血清白...
作者:庞雅湘; 聂启昊; 刘晓宁; 王帅; 冯琦; 牛洪琳 期刊:《河北医科大学学报》 2019年第03期
作者:刘友平; 丁慧荣; 肖斌; 罗文炽; 李洪 期刊:《山西医药》 2005年第01期
目的寻找一种更适合肝细胞蛋白质提取的细胞裂解液配方.方法配制不同组成和不同浓度的细胞裂解液,分别对相同条件下培养的肝细胞进行裂解并进行蛋白定量及十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)佐证.结果不同组成及不同浓度的细胞裂解液对肝细胞裂解作用存在显著差异.结论去污剂用4% 3-[(3-胆酰胺丙基)-二乙胺]-丙磺酸(CHAPS)的细胞裂解液对肝细胞裂解效果最好.
作者:吴顺华; 成军; 郑玉建; 张跃新; 刘妍; 郭江; 张黎颍; 王国荃 期刊:《世界华人消化》 2005年第13期
目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建As2O3处理的人肝癌细胞系H印G2差异表达基因的cDNA消减文库,筛选并克隆As2O3调节相关基因,阐明As2O3对肝细胞调节作用的分子生物学机制.方法:以As2O3处理HepG2细胞,同时以PBS处理的相同细胞系作为对照;24 h后制备细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次...
作者:刘志勇; 董驹; 张树波; 马立人; 李新; 王国臣; 陈志全; 郑毛根 期刊:《中华微生物学和免疫学》 2005年第02期
为了寻找一种肺腺癌有效的治疗方法,我们探索肺癌GLC-82细胞产生的热休克蛋白70(HSP-70)的杀瘤作用.HSP-70的制备如下:常规培养的人肺腺癌GLC-82细胞经43℃ 30 min处理后,置常规培养条件下培育12 h,以EDTA-胰蛋白酶复合消化液分散细胞,调整细胞浓度为106/ml,加入10倍体积的细胞裂解液混匀,置4℃ 12~20 h,细胞裂解成絮状,经透析浓缩后以低温高速离心,DEAE-52离子交换色谱和SephdexG-200分子筛过滤及饱和硫酸盐析等方法分离,提纯HSP...
本研究总结了2010年2月-2014年2月间在我院进行股骨头坏死治疗的60例患者的临床资料,并检测这些患者的外周血乙酰肝素酶,并分析患者外周血乙酰肝素酶水平与临床诊断及治疗的关联,现报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1所需试剂血细胞裂解液(购自上海生工公司);鼠抗人Hpa抗体、羊抗鼠HRP抗体(购自美国abcam公司);其他试剂均为分析纯试剂。
作者:王俊怡; 金银鹏; 李洪超; 孟凌玉; 李莉; 王晓今; 周荣; 陈成伟; 傅青春; 程明亮 期刊:《中国组织工程研究》 2017年第17期
背景:旁分泌在间充质干细胞治疗方面起主要作用.提取间充质干细胞裂解液,可以避免直接间充质干细胞本身所致栓塞、肿瘤以及免疫排斥反应等问题,然而目前提取间充质干细胞裂解液的方法存在差异.目的:比较超声破碎及反复冻融方法获得间充质干细胞裂解液的差异.方法:①从健康的人腹部皮下脂肪中分离出脂肪间充质干细胞,经贴壁筛选法纯化细胞,胎牛血清培养基体外培养扩增,并采用流式细胞检测仪鉴定其常用表面标记;②采用反复冻融及...
作者:徐振宇; 任红艳; 毕延震; 郑新民; 李莉; 张佳兰 期刊:《中国生物工程》 2017年第02期
单细胞PCR是以单个细胞所含的DNA或RNA为模板进行扩增,因此其模板的制备是影响整个反应成功与否的关键因素。利用三种不同蛋白酶K细胞裂解液(SDS细胞裂解液、NP-40细胞裂解液、Tween-20细胞裂解液)分别对体外培养成熟的单个猪卵母细胞进行裂解,并直接作为模板进行PCR扩增,结果表明:NP-40细胞裂解液制备的模板质量最好,其扩增效率为95%;其次为Tween-20细胞裂解液,其扩增效率为65%;SDS细胞裂解液产物中未检测到阳性条带。结合显微...
作者:刘频健; 陈静; 姜登钊; 周英棠 期刊:《军事医学》 2012年第12期
目的探索建立有效的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)蛋白质组双向电泳体系,为进一步揭示其促进氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)产酸的作用机制奠定基础。方法以培养的B.cereus为材料,比较蛋白质制备超声破壁时间、新型细胞裂解液、pH梯度和不同上样量对B.cereus蛋白双向电泳结果的影响。结果与结论采用15 min超声破壁提取B.cereus总蛋白,选用新型蛋白质裂解,用长24 cm、pH 4~7的IPG胶条,采用80μg上样量进行等电聚焦,...
作者:Yaojun; REN; Enpeng; HE; Xinhua; WANG; Xinwen; BO 期刊:《生物技术》 2012年第04期
作者:Ardon H De Vleeschouwer S Van Calenbergh F Claes L Kramm CM Rutkowski S Wolff JE Van Gool SW. 期刊:《中国神经肿瘤》 2010年第01期
作者:吴丽萍 唐岩 李颖岳 尹丹妮 庞晓明 期刊:《北京林业大学学报》 2013年第03期
本研究旨在找出最适合枣和酸枣的流式细胞术流程,进而测定它们的基因组大小。结果显示,在所对比的5种裂解液中,WPB最适合枣属植物细胞裂解。以毛果杨为内标,通过比较待测样品和内参G0/G1期峰,计算得出6种枣属植物基因组大小。各枣品种的基因组大小有一定差异,平均基因组大小约为418.56Mb,其中:‘冬枣’的基因组大小为(393.60±4.72)Mb,即C-值为(0.40±0.01)Pg;‘鲁枣2号’的基因组大小为(428.00±3.61)Mb,即...
作者:刘小琴 何毓敏 任玉珊 蔡富强 王艳琳 期刊:《中国医院药学》 2010年第13期
目的:建立肿瘤细胞样品中多胺的HPLC测定法。方法:取处理好的肿瘤细胞裂解液样品,以1,7-庚二胺(DAH)为内标,经苯甲酰氯柱前衍生,乙醚提取衍生物。HPIC分析条件:Luna C18柱(150mm×4.6mm,5μm)为固定相,乙腈-水(62:38)为流动相,流速为1.0mL·min^-1,检测波长为254nm。结果:多胺中的腐胺、精脒和精胺能较好分离。腐胺的检测限为35.36μg·L^-1,精脒为88.90μg·L^-1,精胺为77.74μg·L^-1。多胺各对照品中,腐胺在1...
作者:王曦 李彩梅 劳文燕 许宁 刘英微 张德有 马锐 杨旭琴 朱亭玉 李津 期刊:《中国生物制品学》 2012年第06期
目的比较球磨法、低温超高压破碎法和YeastBuster酵母细胞裂解液法破碎表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的重组汉逊酵母(Hansenulapolymorpha,HP)细胞的效果。方法分别采用球磨法、低温超高压破碎法和细胞裂解液法破碎表达HBsAg的重组HP细胞和重组酿酒酵母(Saccharomycescerevisiea,SC)细胞,测定其细胞破碎率、细胞破碎后蛋白和HBsAg释出量,比较3种方法破碎细胞的效果。结果球磨法使球磨罐和磨球中少量杂质渗入样品,其中氧...
作者:唐慧 董虹 李丽 王金丽 王林坪 左荣霞 高建梅 华映坤 严新民 期刊:《肿瘤防治研究》 2013年第12期
目的应用蛋白芯片技术检测不同患者来源的细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)细胞裂解液和培养上清的蛋白谱改变。方法将3例不同患者来源的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)在体外经细胞因子诱导成CIK细胞,经流式细胞术测定细胞表型后,分别收集培养第20天的CIKN胞和细胞培养上清,应用AAH—BLM-1蛋白芯片分别获得CIK细胞裂解液和细胞培养上清中507个蛋白的改变。结果CIK细胞...