作者:陈肖宏; 闻晓波(综述); 冉旭华(审校) 期刊:《中国生物制品学》 2019年第10期
轮状病毒(rotavirus,RV)是一种人畜共患病原体,给畜牧业和人类健康带来巨大威胁。对RV感染的治疗,目前尚无有效药物,接种疫苗是有效防控RV性胃肠炎暴发的重要措施。目前人商品化RV疫苗均为口服减毒活疫苗,存在散毒风险及潜在安全性等问题,且该疫苗在不发达国家的免疫效力较低,因此,非复制型疫苗很可能成为主要的候选疫苗。本文以RV结构蛋白VP6为基础,对该蛋白在RV免疫应答中的作用及其在RV非复制型疫苗的研发及防治中的应用作一综...
作者:原霖; 张瑜; 刘洋; 王婧怡; 寇占英; 亢文华; 杨林; 王传彬; 倪建强 期刊:《中国预防兽医学报》 2018年第06期
为在杆状病毒表达系统中表达和纯化A群猪轮状病毒(PoRVA)VP6结构蛋白,在PoRVA VP6基因5'端融合添加组氨酸标签(6×His)后,克隆至杆状病毒表达载体pFastBac HTB中,得到重组转移载体pFastBac-VP6,并将其转化至DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组杆状病毒杆粒转染Sf9细胞后收获重组杆状病毒rBac-PoRVA-VP6,经SDS-PAGE和western blot鉴定结果显示,表达的PoRVA重组VP6蛋白约45 ku,并且能够被PoRVA阳性血清识别。上...
作者:汤亚方; 曾伟伟; 王庆; 王英英; 石存斌; 冯茹; 高辉; 王承宝 期刊:《淡水渔业》 2018年第01期
为了制备高效的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型VP6蛋白多克隆抗体并对其特异性进行鉴定,实验以草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型HZ08株为模板,采用PCR方法扩增S9基因,将该S9基因与pET-32a(+)载体连接构建pET-32a-S9原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)后用IPTG诱导表达;纯化后的重组VP6蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,使用间接ELISA方法测定抗体效价,Western blot和IFA试验鉴定抗VP6蛋白多克隆抗体特异性。结果显示草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型的S9基因在原核表...
作者:李道群; 彭杰; 甸子芩; 王文广; 张阿梅; 冯悦; 牛华; 代解杰; 夏雪山 期刊:《中国实验动物学报》 2017年第02期
目的探究树鼩原代小肠上皮细胞的增殖特性,建立人轮状G1P[8]型病毒体外感染树鼩原代小肠上皮的细胞模型。方法采用胶原酶XI和中性蛋白酶I联合消化法获取树鼩原代小肠上皮细胞,经纯化和鉴定,用人轮状G1P[8]型病毒感染细胞,测定培养上清的病毒滴度和载量,并用Western blot和间接免疫荧光检测法检测人轮状病毒G1P[8]型VP6蛋白的表达情况,评价人轮状G1P[8]型病毒体外对树鼩原代小肠上皮细胞的感染性。结果分离的树鼩原代小肠上皮细胞经...
作者:尹兴晓 文喻玲 赵庆欢 于洋 陈元鼎 期刊:《中国生物制品学》 2008年第05期
目的检测在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的重组轮状病毒(Rotavirus,RV)Vp6蛋白和RvSAll感染的MA104细胞中不同时间表达的Vp6蛋白及其分布规律。方法应用纯化的重组A组人轮状病毒TB-Chen株Vp6(Wp6)蛋白和RvSAll分别免疫豚鼠,制备抗血清,以抗rVp6豚鼠血清作为检测抗体,应用间接免疫荧光技术检测rVp6蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达。分别用抗Vp6和抗RVSA11豚鼠血清检测Vp6蛋白和RVSAll株在感染的MA104细胞中的分布。结果在...
作者:魏鹏 孙恩成 刘霓红 杨涛 徐青元 秦永丽 赵晶 冯瑜菲 王文世 张翠云 吴东来 期刊:《中国预防兽医学报》 2012年第05期
为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb),本研究利用血清型1型BTV(BTV1)免疫BALB/c鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并用BTV1包被ELISA板,通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTV1的MAb的杂交瘤细胞株(2810、3D4和4H8)。利用表达BTVl主要蛋白的真核表达重组质粒转染BHK-21后,对所制备的杂交瘤细胞株上清进行间接免疫荧光(IFA)以及westernblot鉴定,结果显示:2810和4H8与VP7蛋白反应,而3D4与VP6蛋白反...
作者:韩斆 陈建飞 时洪艳 张鑫 石达 迟延彬 李长龙 冯力 期刊:《中国预防兽医学报》 2014年第11期
为制备猪A群轮状病毒(RV)VP6蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达、纯化的重组VP6蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,rVP6-GST为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗VP6蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1F4).MAb鉴定结果显示其抗体亚类为IgG1型,轻链为κ链;细胞上清液及腹水效价分别为1:12 800和1:106.Westem blot和间接免疫荧光结果显示该MAb能够与天然的VP6蛋白反应.应用肽扫描技...