作者:程浩; 陈安民; 游洪波 期刊:《中国康复》 2004年第04期
目的:探讨体外分离、培养及鉴定前软骨干细胞(PCSC),为相关的实验研究奠定基础. 方法:采用酶消化法从新生大鼠干骺端中收集细胞,用免疫磁珠法分选出前软骨干细胞,用DMEM-F12培养基进行体外培养,用免疫组化方法鉴定,对分离出的前软骨干细胞进行相关分子生物学研究.结果:从新生大鼠干骺端中成功培养出前软骨干细胞,培养条件下贴壁生长,成团块状,细胞表面有FGFR-3的标记物;细胞生长迅速. 结论:在体外培养条件下可以从新生大鼠干骺端中...
作者:张衣北; 陈安民; 郭风劲; 黄士龙 期刊:《中华小儿外科》 2006年第11期
目的研究激活的Notch1信号系统抑制体外培养的前软骨干细胞(precartilainous stem cells,PSCs)凋亡及其机制。方法用RT-PCR检测PSCs细胞中Notch信号系统的表达,并分别向培养细胞中加入Notchl激活剂rhNF-kB、抑制剂γ-secretase inhibitor Ⅱ(MW167)和Bcl-2抑制剂HA14—1,空白对照加PBS缓冲液,在凋亡诱导剂Celecoxib诱导后,用MTT检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡和WesternBlot检测Hes-1及Bcl-2蛋白的表达。结果PSCs细...
作者:丁然; 张勇; 游洪波; 李锋; 孙凯 期刊:《中国组织工程研究》 2010年第29期
背景:作者前期试验证实了外源性细胞因子人转化生长因子β3具有很强的诱导前软骨干细胞向成熟软骨分化并促进其增殖的能力。国外的研究均证实了在自组装肽纳米纤维支架中三维培养有利于软骨源性干细胞的增殖与分化。目的:将人转化生长因子β3基因转染于三维培养于KLD-12肽纳米纤维支架内的前软骨干细胞中,并比较其与二维培养前软骨干细胞转染效率的差异。方法:以免疫磁珠分选法获取并纯化前软骨干细胞,将其种植于KLD-12肽纳米纤维...
作者:丁然; 游洪波; 李锋; 孙凯 期刊:《中国组织工程研究》 2010年第20期
背景:前期研究证实脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖具有促进作用,但其作用机制不明确。目的:进一步探讨脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖分化的影响,并观察其对前软骨干细胞Ihh/PTHrP信号通路活性的影响。方法:采用免疫磁珠分选法获取并纯化SD大鼠前软骨干细胞,使用频率为50MHz,电场强度为1mT的脉冲电磁场进行干预,0.5h/次,2次/d,干预2,4,6d后收集细胞,以不给予磁场刺激的为空白对照。通过RT-PCR法检测细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的...
作者:王俊芳; 夏仁云; 方煌; 陈安民; 尹德龙; 程浩 期刊:《中华物理医学与康复》 2009年第05期
目的研究脉冲电磁场对免疫磁性分选人前软骨干细胞(PSCs)增殖功能的影响。方法采用酶消化法从流产胎儿下肢股骨干骺端中收集细胞,选用免疫磁性分选技术分离出PSCs;经体外扩增培养后采用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光、RT—PCR等技术鉴定纯化后的PSCs。采用50Hz 1mT脉冲电磁场间断刺激纯化后的PSCs,并绘制细胞生长曲线,采用MTT法测定细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果从流产胎儿干骺端中成功培...
作者:许凯; 陈安民; 成薇婷; 郭风劲 期刊:《中华实验外科》 2011年第07期
目的观察印度豪猪蛋白(Ihh)和甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)信号通路对大鼠前软骨干细胞(PSCs)分化和增殖的调控作用。方法应用免疫磁珠筛选技术获得大鼠PSCs。噻唑蓝(M3T)比色法筛选Ihh信号阻断剂环王巴明(Cyclopamine,Cyclo)的最低有效浓度,PTHrP真核质粒(pEGPF—N1-PTHrP)转染PSCs。细胞分4组:对照组(Control,PBS100μl,n=3)、Ihh信号阻断组(Ihh^-,20nmol/L Cyclo 100μl,n=3)、PTHrP信号增强组(PTHrP^+,...
作者:黄志刚 李锋 游洪波 陈安民 期刊:《骨科》 2008年第03期
目的研究转化生长因子-β3(TGF-β3)诱导大鼠前软骨干细胞(PSCs)向软骨方向分化的可行性以及剂量效应关系。方法在体外将分离纯化的大鼠PSCs置于含有不同剂量TGF-β3的诱导培养液中培养,依据其浓度分为5个实验组和1个对照组(不含TGF-β3),观察细胞生长情况,分别进行Ⅱ型胶原的免疫组织化学检测及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Ⅱ型胶原mRNA表达。结果细胞生长良好。免疫组织化学检测对照组Ⅱ型胶原表达阴性,而含TGF-β3的诱导...
作者:张瑞 王俊芳 程力 期刊:《中国矫形外科》 2013年第13期
摘要[目的]研究兔前软骨干细胞PSCs,(precartilagiousstemcells)的分离、培养方法及增殖、表型特征,为细胞移植治疗椎间盘退变,提供合适的种子细胞。[方法]取胎兔骨骺周围软骨膜(LaCroix环)中的细胞进行原代培养,然后采用免疫磁珠分离系统分选纯化PSCs。体外培养,传代,冻存复苏,绘制生长曲线,观察细胞特性。分别采用免疫组化、免疫荧光、RT—PCR等方法鉴定纯化后的PSCs。[结果]免疫磁珠分离可获得纯度较高的兔PSCs,培...