摘要:目的观察印度豪猪蛋白(Ihh)和甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)信号通路对大鼠前软骨干细胞(PSCs)分化和增殖的调控作用。方法应用免疫磁珠筛选技术获得大鼠PSCs。噻唑蓝(M3T)比色法筛选Ihh信号阻断剂环王巴明(Cyclopamine,Cyclo)的最低有效浓度,PTHrP真核质粒(pEGPF—N1-PTHrP)转染PSCs。细胞分4组:对照组(Control,PBS100μl,n=3)、Ihh信号阻断组(Ihh^-,20nmol/L Cyclo 100μl,n=3)、PTHrP信号增强组(PTHrP^+,1.0μg pEGPF—N1-PTHrP,n=3)和双重干预组(Ihh^-/PTHrP^+,20nmol/L Cyclo 100tμ+1.0μg pEGPF—N1-PTHrP,n=3)。干预2周后应用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测Ihh、PTHrP、Ⅱ型胶原(ColⅡ)的mRNA表达,BrdU掺入法测细胞增殖,免疫组织化学检测ColⅡ表达,阿辛蓝染色检测酸性糖胺多糖含量。结果成功获得PSCs,筛选获得Cyclo最低有效工作浓度为20nmol/L;1.0μg PTHrP真核质粒转染效率〉60%,转染后高表达该基因;Ihh^-组ColⅡ基因和蛋白表达明显下降,PTHrP^+组和Ihh^-/PTHrP^+组ColⅡ基因和蛋白表达稳定,酸性糖胺多糖分泌多;BrdU实验显示Ihh^-组和Ihh/PTHrP^+组增殖率分别为(23.26±3.96)%和(21.65±5.12)%,相对Control组(35.42±3.79)%差异有统计学意义(P〈0.01),而两组间差异无统计学意义(P〉0.05)。结论Ihh-PTHrP信号通路参与对PSCs分化和增殖的调控,Ihh信号可独立调控PSCs的增殖,但对其分化的调控依赖PTHrP信号的作用。
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