首页 期刊 中华实验外科 Ihh信号通过甲状旁腺激素相关肽依赖和非依赖方式参与调控前软骨干细胞的分化和增殖 【正文】

Ihh信号通过甲状旁腺激素相关肽依赖和非依赖方式参与调控前软骨干细胞的分化和增殖

作者:许凯; 陈安民; 成薇婷; 郭风劲 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科; 武汉430030; 华中科技大学同济医学院附属中西医结合医院肿瘤科
前软骨干细胞   信号通路   分化   增殖  

摘要:目的观察印度豪猪蛋白(Ihh)和甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)信号通路对大鼠前软骨干细胞(PSCs)分化和增殖的调控作用。方法应用免疫磁珠筛选技术获得大鼠PSCs。噻唑蓝(M3T)比色法筛选Ihh信号阻断剂环王巴明(Cyclopamine,Cyclo)的最低有效浓度,PTHrP真核质粒(pEGPF—N1-PTHrP)转染PSCs。细胞分4组:对照组(Control,PBS100μl,n=3)、Ihh信号阻断组(Ihh^-,20nmol/L Cyclo 100μl,n=3)、PTHrP信号增强组(PTHrP^+,1.0μg pEGPF—N1-PTHrP,n=3)和双重干预组(Ihh^-/PTHrP^+,20nmol/L Cyclo 100tμ+1.0μg pEGPF—N1-PTHrP,n=3)。干预2周后应用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测Ihh、PTHrP、Ⅱ型胶原(ColⅡ)的mRNA表达,BrdU掺入法测细胞增殖,免疫组织化学检测ColⅡ表达,阿辛蓝染色检测酸性糖胺多糖含量。结果成功获得PSCs,筛选获得Cyclo最低有效工作浓度为20nmol/L;1.0μg PTHrP真核质粒转染效率〉60%,转染后高表达该基因;Ihh^-组ColⅡ基因和蛋白表达明显下降,PTHrP^+组和Ihh^-/PTHrP^+组ColⅡ基因和蛋白表达稳定,酸性糖胺多糖分泌多;BrdU实验显示Ihh^-组和Ihh/PTHrP^+组增殖率分别为(23.26±3.96)%和(21.65±5.12)%,相对Control组(35.42±3.79)%差异有统计学意义(P〈0.01),而两组间差异无统计学意义(P〉0.05)。结论Ihh-PTHrP信号通路参与对PSCs分化和增殖的调控,Ihh信号可独立调控PSCs的增殖,但对其分化的调控依赖PTHrP信号的作用。

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