“基因工程”是人教版高中生物学新教材中的重要内容,也是高考的热点和难点之一。该内容涉及到分子生物学中常用的3种印迹技术:Southern blot、Northern blot和Western blot。结合高考试题对这3种技术的具体操作过程和用途进行了介绍,以期师生对该部分内容有更加深入的理解。
“基因工程”是人教版高中生物学新教材中的重要内容,也是高考的热点和难点之一。该内容涉及到分子生物学中常用的3种印迹技术:Southern blot、Northern blot和Western blot。结合高考试题对这3种技术的具体操作过程和用途进行了介绍,以期师生对该部分内容有更加深入的理解。
作者:郑和平; 覃晓琳; 黄进梅; 薛耀华; 白顺; 吕萍; 杨斌 期刊:《皮肤性病诊疗学》 2015年第01期
目的:比较梅毒螺旋体Tp0453缩短抗原(Tp0453-s)和Tp47抗原在不同期梅毒检测中的应用。方法:表达并纯化Tp47抗原,进行SDS-PAGE电泳和western blot鉴定。western blot检测比较Tp0453-s和Tp47抗原在不同期梅毒患者检测中的阳性率。结果:Tp47和Tp0453-s 2种抗原均可与一期、二期和三期梅毒患者血清发生反应,而与非梅毒病人血清无交叉反应性。Tp0453-s和Tp47抗原与隐性梅毒患者的血清反应阳性率分别为55.6%(10/18)和94.4%(17/18...
作者:珠丽; 卢萍; 席领军; 高峰; 李玉玲; 姜凯 期刊:《生物化工》 2019年第06期
用Southern blot技术检测小花棘豆Alternaria oxytropis内生真菌野生株(OW7.8)和酵母氨酸还原酶基因(sac)敲除株(M1),为研究基因功能奠定基础。以OW7.8和M1为材料,利用PCR法制备地高辛(DIG)标记探针,进行基因组Southern blot检测。用PvuⅡ切割M1基因组DNA后,用sac特异性探针对其进行Southern blot,杂交结果呈阴性,表明M1中sac已被敲除;用Eco RⅤ和PstⅠ切割OW7.8基因组DNA,杂交结果呈阳性,说明野生株有sac;用hph特异性探针与M1的Pv...
作者:王双双; 赵红梅; 周丹娜; 蔡行; 耿超 期刊:《黑龙江畜牧兽医》 2019年第17期
为了探讨日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机制及其蛋白与宿主蛋白的相互作用关系,试验以GenBank中收录的JEV HW1株NS3基因序列为模板设计引物,经PCR扩增获得NS3基因序列后,采用ClonExpress克隆技术将NS3基因连接到真核表达载体p EGFP-C3上,将得到的产物pEGFP-C3-NS3送生工生物工程(上海)股份有限公司测序;使用X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent体外转染幼地鼠肾细胞(BHK21细胞),观察24 h后应用Wes...
作者:闫静波; 李辉; 邱鹏; 刘登湘; 卫茹; 窦艳 期刊:《诊断病理学》 2019年第11期
作者:袁媛; 陈志; 罗卫星; 蔡惠芬 期刊:《黑龙江医药科学》 2019年第05期
目的:为了制备抗体效价高、特异性好,可有效满足RERG基因(Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor)上蛋白的相关测定,填补RERG多克隆抗体的研究空白。方法:试验使用已经在实验室中克隆的RERG基因序列用于原核表达载体,构建原核表达载体pET32a-RERG;随后进行RERG蛋白的原核表达;完成RERG蛋白的纯化以及大白兔RERG多克隆抗体的制备与纯化。结果:通过Western-blot鉴定发现RERG的目的条带单一;使用ELISA检测纯化后的抗体...
作者:邓德城; 贝伟剑 期刊:《广东药科大学学报》 2016年第02期
目的探讨佛手提取物(Finger Citron extract)对Hep G2细胞中胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)及其核转录调控因子过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和肝核因子4α(HNF4α)的蛋白表达量的影响。方法采用MTT法得出佛手提取物对Hep G2细胞生长无明显抑制的浓度,Western blot检测CYP7A1、PPARα和HNF4α的蛋白表达量;采用siRNA干扰技术沉默调控因子PPARα后,观察佛手提取物对CYP7A1的蛋白表达的影响。结果佛手提取物浓度为0.2、1、5、25μg/...
作者:张秀春; 林俊扬; 彭明; 郭丽琼; 林俊芳 期刊:《热带亚热带植物学报》 2006年第06期
对所获得的9株无筛选标记基因的T1代莆豆8008转基因大豆的T2代进行了分析。PCR和Southern杂交检测表明标记基因已不存在于转基因株系中,同时目的基因以纯合或者杂合状态存在于部分株系中,除草剂抗性分析也表明这些转基因株系已不再具有抗除草剂的能力。Northern杂交检测表明△^6-脂肪酸脱氢酶基因在转基因株系中可以转录。GC分析表明其中6个转基因植株富含GLA。
作者:王云霄; 张颖; 江璐玎; 牛蓓; 陈放 期刊:《热带亚热带植物学报》 2008年第04期
采用RT—PCR和RACE技术,从大戟科(Euphorbiaceae)耐旱植物麻疯树(Jatrophacurcas)cDNA中克隆得到了一个麻疯树质膜内膜蛋白(PIP)新基因,命名为止胛。聚类分析表明,麻疯树PIP蛋白与蓖麻、葡萄和菠菜的PIP蛋白在进化上有最近的亲缘关系。将JcPIP基因在非洲爪蟾卵母细胞(xenopus oocytes)中异源表达发现细胞膨胀率扩大了10倍,表明如胛基因编码的是一个水通道蛋白。合成亲水性、抗原性好的如胛保守序列多肽,制备并纯化如...
作者:王浩然; 王洪梅; 朱其军; 武建明; 刘晓; 宋玲玲; 何洪彬; 王立群 期刊:《家畜生态学报》 2012年第02期
根据牛整合素β5(Integrin Bata5,ITGB5)的基因序列,设计并构建了真核表达载体pcDNA3.1-flag-β5和shRNA重组慢病毒载体H1-shRNA145、H1-shRNA726,利用脂质体介导法,将pcDNA3.1-flag-β5分别和H1-shRNA145、H1-shRNA726共转染293T细胞,并以针对LacZ基因的H1-shRNA-LacZ与pcDNA3.1-flag-β5共转染293T细胞作为对照,以持家基因β-actin为蛋白内参,通过Western blot检测ITGB5的表达,结果表明,H1-shR-NA145、H1-shRNA726均可抑制ITGB5的表...
作者:姜虹; 王皓晨; 王杰; 施宪宝 期刊:《锦州医科大学学报》 2016年第01期
目的研究ERK!信号通路相关蛋白在癫痫状态下的改变,以探讨ERK信号转导通路在癫痫发病机制中的作用。方法实验分为两组,分别为Tremor大鼠组和Wistar大鼠组。通过Western Blot方法检测两组大脑皮质内ERK蛋白和p-ERK蛋白含量的异常变化。结果通过PCR鉴定了Tremor大鼠,试验分为Tremor组(实验组)和Wistar组(对照组)。利用western Blot方法测定ERK1/2和p-ERK1/2蛋白在Tremor大鼠和Wistar大鼠的皮质中均有表达,Tremor大鼠的ERK1/2和p-...
作者:张梦瑶; 杨峰; 刘开东; 刘积凤; 柳楠; 贺建宁 期刊:《中国兽医》 2018年第10期
作者:胡忠浩; 王珊珊; 徐铁军 期刊:《徐州医科大学学报》 2006年第04期
目的研究离体培养的大鼠神经干细胞(NSCs)中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR2B的表达。方法从孕18~19天胎鼠海马中分离、培养、传代、鉴定NSCs,用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹检测传代1次NSCs中NMDA受体亚单位NR2B的表达。结果源自孕18~19天胎鼠海马的NSCs,即可以表达NMDA受体亚单位NR2B。结论体外培养的NSCs能表达NMDA受体亚单位NR2B。
作者:刘轲; 鲁红伟; 冯静静; 刘敬霞; 李建生; 赵敏; 李宁; 高剑峰; 王幼平; 张振强 期刊:《时珍国医国药》 2015年第05期
作者:虞跃跃; 李双; 赵叶; 杨金华; 韩君萍; 樊志忠; 崔建美 期刊:《时珍国医国药》 2016年第11期
目的 探讨针刺对过敏性哮喘大鼠肺组织中p-p38MAPK蛋白表达的影响。方法 将40只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、哮喘模型组、哮喘模型针刺组和哮喘模型阻断剂组,每组10只。各组分别给予相应干预后,采用免疫组织化学法、Western Blot法检测大鼠肺组织中p-p38MAPK蛋白的表达。结果 免疫组织化学法检测显示空白组、哮喘模型针刺组和哮喘模型阻断剂组的肺组织细胞核中p-p38MAPK蛋白表达呈阴性,而哮喘模型组的肺组织细胞核表达呈阳性;W...
作者:龙娟; 吴诗琦; 胡志远; 贺莉; 陈刚; 卢运萍; 马丁 期刊:《中国妇幼保健》 2010年第11期
目的:研究层粘连蛋白及其67KD受体在人卵巢癌细胞上的表达,探讨其在卵巢癌发病中的意义。方法:分别设计人层粘连蛋白及其67KD受体两对引物,从细胞中提取总RNA,采用流式细胞术、RT—PCR和Western—blot技术检测层粘连蛋白及其67KD受体在5种人卵巢癌细胞上的表达情况。结果:A2780、Caov3、Cocl、Sw6264种卵巢癌细胞均有层粘连蛋白及其67KD受体mRNA和蛋白质表达,但SKOV3细胞不表达层粘连蛋白及其67KD受体。结论:层粘连蛋白及...
作者:李丽; 李武; 张景华 期刊:《中国妇幼保健》 2014年第19期
目的:构建真核表达质粒pEGFP-Mfn2,并将其转染乳腺癌MCF-7细胞系,观察其在乳腺癌MCF-7细胞中的Mfn2基因表达情况及其对乳腺癌细胞MCF-7迁移能力的影响。方法:①以正常人骨骼肌为模板获得Mfn2基因片段,用限制性核酸内切酶XhoI、HidⅢ分别对pEGFP-N1和获得的Mfn2基因片段进行双酶切,并将酶切产物进行重组,最后对其行PCR、酶切和DNA测序鉴定。②用激光共聚焦显微镜、Western blot方法及划痕实验分别对转染后的乳腺癌细胞MCF-7中的Mf...
作者:薛茗方; 潘峰; 王茜; 张桂英; 刘雅娟; 赵刚 期刊:《中国妇幼保健》 2013年第31期
目的:探讨姜黄素对人乳腺癌细胞株(MCF-7)中miR-1表达的影响及其意义。方法:采用浓度分别为2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L的姜黄素处理MCF-7细胞株,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real—timePCR)的方法检测其miR-21的表达。免疫印迹法(Westernblor)方法检测miR-21调控的目的蛋白PDCD4的表达。结果:随着姜黄素浓度的升高,miR-21的表达量明显下降,目的蛋白PDCIM的表达量明显上升。结论:在乳腺癌细...
作者:袁禧先; 张爽; 徐宗云; 王凤荣; 董慧慧 期刊:《中国现代医生》 2012年第15期
目的通过对人结肠癌细胞株HT-29转染shRNA重组质粒后观察Survivin基因的变化。方法设计两条针对Survivin基因CDS区不同位点的siRN段并构建shRNA表达载体,重组质粒使用阳离子脂质体法转染结肠癌细胞株HT-29。RT—PCR,Western—blot检测转染后mRNA及蛋白表达。结果转染shRNA重组质粒可有效抑制HT-29细胞Survivin的表达,Survivin mRNA和蛋白表达下调,表明Survivin基因沉默效果较高:两个转染组之间相比pshRNA1组Survivin基因的表...