作者:祖立闯; 沈志强; 郭广君; 王金良; 苗立中; 董林; 吕素芳 期刊:《家畜生态学报》 2014年第01期
为建立一种快速的猪伪狂犬病毒抗体检测方法,本研究参照已发表的PRVSA株基因组序列,PCR扩增了长约1070bp的gD基因片段,将目的片段定向克隆到pET30a原核表达载体,转化BL21表达菌,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组gD蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白为二抗,建立了检测猪伪狂犬病毒抗体的PPA—ELISA检测方法。该方法与其...
作者:张健淞; 夏雨婷; 沈懿娟; 梁中洋; 李玉峰 期刊:《中国兽医科学》 2018年第08期
为了探讨多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素(PMT)对真核细胞的致病机制,将编码PMT的tox A基因以及其N端tox N(1~1461 bp)和C端tox C(2 958~3 858 bp)分别克隆到原核表达载体p ET-32a中进行蛋白表达。3个重组蛋白在大肠杆菌中均以可溶性形式表达,其分子质量大小分别为176 ku、88 ku和67 ku,均能与His单克隆抗体发生特异性免疫反应。体外细胞毒性试验和豚鼠皮肤坏死试验均表明,r PMT与天然PMT具有相同的生物学功能。此外,以原核表达...
作者:田莉莉; 李林 期刊:《畜牧与兽医》 2011年第11期
参照已发表的PPV基因组序列,设计合成1对特异性引物,PCR扩增了长约810bp的VP2基因片段。将目的片段定向克隆到pE330a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化B121表达菌,经IPTG诱导得到了以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,免疫印迹检测证明纯化的重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了检测猪细小病毒抗体的VP2-ELISA诊断方法。该方法检测其他7种常见猪病病毒(PCV-2、PR...
作者:苗立中; 祖立闯; 王艳; 马秀丽; 亓丽红; 宋敏训; 沈志强; 韩文瑜 期刊:《中国兽医学报》 2017年第03期
参照IBVS1基因序列,RT—PCR扩增长约867bp的s1基因主要抗原区域,将目的片段定向克隆到pET30Ⅱ原核表达裁体,转化Rossetta表达菌,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组s1蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的免疫活性。以该蛋白作为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)抗体的间接ELISA检测方法。该方法与其他6种常见禽病病毒(H5亚型禽流感病毒(H5AIV)、H9亚型...
作者:杨丽梅; 马力; 张志美; 徐倩倩; 郭时金; 沈志强; 李峰; 张颖; 王艳萍 期刊:《动物医学进展》 2013年第09期
为分析兔出血症病毒地方分离株的变异情况,并获得活性良好的兔出血症病毒基因工程抗原,对兔出血症病毒ZB分离株的VP60基因进行了克隆、序列分析与原核表达。ZB株分离病毒与GenBank中的6株RHDVVP60基因的核苷酸序列同源性在92.5%~97.9%之间,参照ZB株分离病毒VP60基因序列,设计合成一对特异性引物,PCR扩增了876bp的VP60基因片段。将目的片段定向克隆至pET30a表达载体中,经鉴定正确后,重组质粒转化BL21表达菌,经IPTG诱导...
作者:屈野; 徐俊杰; 于婷; 付玲; 宋小红; 陈薇 期刊:《武警后勤学院学报·医学版》 2010年第01期
【目的】分析CMG2胞外区的分子结构与功能,探讨ATR与PA结合的活性位点及特征,为阐明炭疽毒素的致病机理提供依据。【方法】用pQE30表达质粒在大肠杆菌内表达长短不同的3个CMG2胞外区截短片段,经纯化后,用Western blotting和细胞保护性实验对3个重组蛋白进行分析。【结果】发现3个重组蛋白均可与485单抗结合,但均没有细胞保护活性。【结论】3个截短蛋白失去了与PA结合的能力,说明CMG2的187—217之间氨基酸残基对PA结合很重要...
作者:祖立闯 王金良 管宇 沈志强 董林 李娇 期刊:《中国预防兽医学报》 2010年第03期
为建立一种快速检测流行性乙型脑炎病毒抗体的方法,本研究参照已发表的JEV基因组序列,应用RT-PCR扩增了长约1000bp的E基因片段,连接pET30a表达载体中,经诱导后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明其具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了检测流行性乙型脑炎病毒抗体的E-ELISA诊断方法。该诊断方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,为JEV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和JEV流...
作者:郑仲华 李东升 姚俊庸 常艳 勾红潮 刘文俊 赵明秋 毛晶丹 陈金顶 期刊:《中国畜牧兽医》 2014年第05期
本试验利用PCR技术,扩增得到猪瘟病毒(CSFV)C株E2基因的主要抗原片段A/D区549bp,将其酶切纯化后,与已酶切纯化的pET-32a进行16℃过夜连接,转化大肠杆菌BL21。从转化成功的氨苄培养板挑取合适菌落进行PCR,挑取目的条带正确的菌落加至LB培养基进行过夜培养后送测序。将测序正确的菌液划板,挑菌培养并用IPTG进行诱导表达。得到的蛋白进行SDS-PAGE,在约39ku位置有蛋白条带。将蛋白纯化后,分别利用自制兔抗CSFV阳性血清及临...