摘要：目的 建立快速分离人皮肤成纤维细胞的方法,并探讨成纤维细胞在成脂、成骨、 成软骨和成神经的多向分化潜能。方法 利用组织块培养法分离人体皮肤成纤维细胞,通过形 态学观察、流式分析、Vimentin 蛋白染色鉴定成纤维细胞;再利用生长曲线、核型分析、线粒体 染色分析不同传代细胞的增殖速度,线粒体及染色体形态的改变;最后进行成纤维细胞成脂、成 骨、成软骨和成神经的诱导分化实验,鉴定其多向分化潜能。两代细胞增殖速度及线料体相对 量的比较采用 t 检验统计分析。结 果 分离的皮肤成纤维细胞呈典型梭状及多角形;高表达细 胞表面标记物 CD90(NCF1,NCF2占比分别为 99.9,98.7)和 CD73(NCF1,NCF2占比分 别为98.2,85.6),但极少表达造血干细胞标记物 CD34(NCF1,NCF2占比分别为 1.8,2.6);细胞 Vimentin 蛋白表达呈阳性,阳性率为100;对细胞生长曲线进行分析,表明分离 后不同代次细胞增殖差异无统计学意义(t=1.586,P =0.1567);线粒体相对含量统计分析,同一株细胞系第5代(相对荧光强度值: 6876±577.8)与第 10 代(相对荧光强度值:7371±471.9)之 间的差异无统计学意义(t = 0.664,P = 0.543);核型分析分别显示传代后保持染色体数目为正常 46 条且形态无明显异常;经诱导后成纤维细胞可向成脂、成骨、成软骨和类神经分化。结论 利 用组织块培养法分离出的人体皮肤成纤维细胞状态稳定,增殖能力强,具有成脂、成骨、成软骨 和成神经多向分化诱导潜能,为细胞移植修复骨损伤、软骨损伤和神经损伤性疾病的临床研究 提供细胞来源及实验依据。

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