摘要:为了进一步阐明整合蛋白α5β1过表达诱导非粘着状态的人肝癌细胞SMMC-772l失巢凋亡的机理,利用poly-HEME阻断细胞贴壁,诱导失巢凋亡,在poly-HEME包被的96孔板中检测细胞生存率,利用Westem印迹法检测了与细胞信号转导密切相关的粘着斑激酶(FAK)、蛋白激酶B(PKB)及生存蛋白survivin的表达水平,α5β1过表达细胞株在去粘附状态下的生存率明显低于对照细胞.在生长8d时,以整合蛋白不同亚单位转染的α5β1-772l、β1-772l和α5-772l细胞,活细胞数分别降至对照组的40%、45%和83%.这说明整合蛋白α5β1过表达细胞株,特别是α5β1-772l和β1-772l细胞的失巢凋亡明显加快.细胞悬浮生长24h后,α5β1过表达细胞株都有不同程度的凋亡发生;同时粘着斑激酶(FAK)和蛋白激酶B(PKB)表达量及其磷酸化水平均低于对照细胞,而survivin表达水平在α5β1-772l中最高,在β1-772l中最低,在给予天然细胞外基质纤粘连蛋白的条件下,α5β1-772l和β1-772l细胞的FAK和PKB的磷酸化水平却呈升高趋势.结果说明,FAK和PKB的变化与细胞的粘附状态密切相关,并且参与整合蛋白α5β1过表达细胞在去粘附状态下失巢凋亡的发生。
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