生物技术通讯杂志 省级期刊

利用转座系统在葡糖杆菌中表达山梨糖脱氢酶

作者：赵岩; 张惟材; 陈惠鹏 刊期：2007年第05期

目的：利用Mini—Tn5转座系统在葡糖杆菌中表达山梨糖脱氢酶（SDH）。方法：分离得到从山梨醇产糖的快生型小菌Y25K2，利用PCR方法扩增并分析快生型小菌的16SrDNA；构建pUT-mini—Tn5-Tet转座载体，将SDH基因（sdh）插入该载体，利用接合转移，将sdh整合至快生型小菌Y25K2的染色体，通过Western印迹检测SDH的表达。结果：16SrDNA鉴定结果初步表...

沙丘芦苇胸腺嘧啶二磷酸葡萄糖脱水酶的序列分析与结构预测

作者：邢家强; 浦铜良 刊期：2007年第05期

目的：用生物信息学方法对沙丘芦苇胸腺嘧啶二磷酸葡萄糖脱水酶（PcTGD）的序列进行分析与结构预测，为后续研究提供参考。方法：以GOR法预测了PcTGD的二级结构，以ProtScale分析它的疏水性，最终通过现有的序列同源性比较，用MODELLER预测了PcTGD的三维结构。结果：PcTGD具有高度保守的活性中心Tyr＊＊＊Lys和N末端的Gly＊Gly＊＊Gly的高度保守...

用反式互补表达载体实现全抗体在CHO-dhfr-细胞中的高效表达

作者：安怀杰; 俞炜源; 孙志伟 刊期：2007年第05期

目的：通过弱化筛选基因二氢叶酸还原酶基因（dhfr），构建双顺反子全抗体表达载体，实现全抗体在CHO细胞中的高效表达。方法：将dhfr基因分为分别编码1-105和106～187氨基酸残基的2部分，分别通过linker与亮氨酸拉链GCN4融合，分别通过内部起始位点序列与抗体轻重链基因偶联，构建成2个双顺反子表达载体pIRESLZdhfr—H和pIRESLZdhfrL。用脂质体...

天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中酮还原酶基因dnrU的阻断突变研究

作者：谢丽萍; 宫倩; 胡又佳; 朱春宝; 朱宝泉 刊期：2007年第05期

目的：研究柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中酮还原酶基因dnrU阻断后的产物（13s）-13-二氢柔红霉素及其他发酵产物的变化。方法：利用同源重组的原理，以大肠杆菌质粒pUC18为基础构建了dnrU基因交换质粒，通过在SIPI-1482染色体上的dnrU基因中插入安普霉素抗性基因来筛选dnrU的阻断突变株。结果和结论：PCR验证表明成功地阻断了dnrU基...

SARS冠状病毒N蛋白和CYP4F3的相互作用

作者：陈亮; 许龙; 曹诚; 王玉民 刊期：2007年第05期

目的：研究SARS冠状病毒（SARS-CoV）N蛋白与CYP4F3的相互作用。方法：应用免疫共沉淀、GST—pull down、BIACORE实验验证SARS—CoVN蛋白与CYP4F3的相互作用。结果：SARS—CoVN蛋白与CYP4F3能够相互作用，BIA-CORE实验证实CYP4F3与SARS—CoVN蛋白的亲和常数为Ko=4．3×10^-11。结论：SARS—CoVN蛋白与CYP4F3在细胞内、外均能形成复合物，这为进一...

结核分枝杆菌Rv3881c突变子的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

作者：李邦印; 李大伟; 王臻; 吴雪琼; 王仲元; 王治伟; 韩慧新 刊期：2007年第05期

目的：融合表达结核分枝杆菌Rv3881c突变子抗原，以便与其他已知的免疫显性抗原联合使用，有效增加结核分枝杆菌感染血清学检验的敏感性和特异性。方法：将克隆的来源干结核分枝杆菌H37Rv株的Rv3881c突变体基因插入原核表达载体pET24b，并在大肠杆菌BL21中获得高效表达；由于重组的Rv3881c突变子抗原片段同C端的6xHis标签融合表达，使用Ni-柱进...

第二届“世界农业科学前沿论坛”通知

刊期：2007年第05期

人颗粒裂解肽片段在大肠杆菌中的表达

作者：李邦印; 王臻; 李大伟; 张灵霞; 王治伟 刊期：2007年第05期

目的：建立颗粒裂解肽（NKG5）的原核表达载体系统，并在大肠杆菌中获得表达。方法：采用寡核苷酸合成、PCR扩增得到NKG5编码序列，克隆到pGEM-T载体上，经测序正确后，再切下编码序列连接到重组表达载体pGEx-4T-1中，转化大肠杆菌BL21，用IPTG诱导重组工程菌表达，采用谷胱甘肽偶联的Sepharose 4B纯化重组蛋白。结果：重组菌株可以表达GST-NKG5...

抗HIV-1白喉免疫毒素的构建及原核表达

作者：于芳; 金宁一; 李昌; 刘玉生; 佟敬山; 金洪涛 刊期：2007年第05期

目的：构建重组DTA—hS120融合基因表达载体，并诱导其在大肠杆菌中表达。方法：通过PCR扩增，获得只含白喉毒素（DT）活性部位（DTA）的基因片段，将其克隆入原核表达载体pET-28a，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，经SDS—PAGE和Western印迹分析鉴定。结果：酶切及DNA序列测定鉴定质粒构建正确；SDS—PAGE和Western印迹分析证实，可表...

靶向性DNA甲基化酶在毕赤酵母中的表达和鉴定

作者：邢克飞; 吴琳; 李燕; 刘新平; 药立波; 李福洋 刊期：2007年第05期

目的：在毕赤酵母中表达融合Myc—His标签的靶向性甲基化酶B1—3a并进行鉴定。方法：以含有B1—3a基因的pcDNA4．0-myc／his质粒为模板，通过PCR扩增获得融合有myc／his标签序列的目的区段B1—3a基因，然后克隆入表达载体pPIC3-5k；电穿孔转化毕赤酵母菌株GS115，经G418筛选后进行甲醇诱导表达，并以SDS—PAGE和Western印迹对表达产物进行鉴定。...

用于筛选抑制丙型肝炎病毒内部核糖体进入位点活性药物的整合型细胞药物筛选模型的构建和评价

作者：周英彪; 王瑞; 肖冬光 刊期：2007年第05期

目的：构建一个能用于筛选抑制丙型肝炎病毒内部核糖体进入位点（HCV—IRES）活性药物的整合型细胞药筛模型。方法：构建携带HCV 5＇-UTR调控报告基因分泌型碱性磷酸酶（SEAP）基因的质粒pHCV5’-SEAP和用作筛选标记的pNeo^R，线性化后共转染于Huh-7细胞中，经G418筛选后得到抗性细胞克隆，进行SEAP定量检测筛选后，得到能用于筛选抑制HCV-IRES...

应用酵母双杂交筛选与CUEDC2相互作用的蛋白质

作者：刘卉; 潘欣; 李慧艳; 张佩景; 李卫华; 张学敏; 周涛 刊期：2007年第05期

目的：应用酵母双杂交技术，筛选与包含CUE结构域的人CUEDC2发生相互作用的蛋白质。方法：应用酵母双杂交系统，以CUEDC2为诱饵筛选人乳腺cDNA文库，寻找能与之相互作用的蛋白质，并运用营养缺陷型培养和X-alpha-Gal等实验提供的信息，筛除假阳性克隆。结果：以CUEDC2为诱饵最终筛出了2个阳性克隆，经测序及生物信息学分析，这2个克隆同为GADD34...

用亲和纯化方法筛选与gankyrin相互作用的蛋白质

作者：白冰; 满江红; 高彦飞; 何昆; 李爱玲; 王红霞; 张学敏 刊期：2007年第05期

目的：作为一个新发现的癌蛋白，gankyrin在肝癌细胞的发生和形成中发挥重要作用。筛选与gankyrin相互作用的蛋白质，从而进一步探讨gankyrin的作用机制。方法：采用亲和纯化技术及质谱鉴定筛选与gankyrin相互作用的蛋白质。结果：初步筛选出了6个与gankyrin发生相互作用的蛋白质，经与MSDB或NCBInr数据库比对，这6个蛋白质均是26S蛋白酶体的组...

ANKRD17蛋白抗体的制备、纯化及检测

作者：舒伟; 李发慧; 邓敏; 潘全; 马清钧; 叶昕 刊期：2007年第05期

目的：制备ANKRD17（P260）蛋白的兔多克隆抗体，以与抗原相结合的方法进行抗体的纯化，并利用纯化的抗体对该蛋白进行细胞内免疫荧光检测。方法：构建表达GST—ANKRD17C端融合蛋白的质粒，在大肠杆菌中诱导表达；制备GST—ANKRD17C端抗原融合蛋白后免疫家兔，对获得的兔多克隆抗血清进行亲和纯化；纯化后的抗体经过Western blot鉴定，用于细胞...

3种纯化重组禽流感病毒NS1抗原方法的比较

作者：霍惠玲; 李永清; 赵燕岭; 张莉; 章振华 刊期：2007年第05期

目的：摸索出最佳分离纯化和复性重组禽流感病毒NS1抗原的方法，得到高纯度的重组蛋白。方法：将重组质粒pET32a—NS1转染大肠杆菌BL21（DE3）后获得表达，分别以尿素变性、复性，Ni—NTA His．Bind Resin亲和，以及脱氧胆酸钠-N-十二烷基肌氨酸钠（DOC—SKL）洗涤溶解等3种纯化方法从表达产物包涵体中分离纯化NS1蛋白，并进行比较研究。结果：...