作者:林涛; 蔡锦玲; 郑凯玲; 黄青峰; 施爱玲 期刊:《安徽农业科学》 2020年第03期
创建可以同时检测番茄抗黄化曲叶病毒病Ty-2基因和抗晚疫病Ph-3基因分子标记的多重PCR体系,以快速准确地鉴定筛选到目标基因型。采用多重PCR结合CAPS技术,同时加入2对引物T0302和TG328,进行扩增及酶切反应,2%琼脂糖凝胶电泳检测,获得不同基因型相应的带型,从而建立多重PCR及产物酶切体系,优化此体系后再进行验证与应用。该多重PCR体系可靠高效,显示共有9种带型对应Ty-2和Ph-3基因相应的基因型,与采用单引物普通PCR技术分别鉴定的基...
作者:查中萍; 万丙良; 殷得所; 杜雪树; 李进波; 夏明元; 戚华雄; 李圆梦 期刊:《湖北农业科学》 2019年第24期
针对转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫水稻(Oryza sativa L.)TT51-1及其回交后代中外源基因的检测建立了一种三引物多重PCR检测方法。结果表明,三引物PCR体系可以准确区分cry1Ab/cry1Ac基因纯合、杂合和阴性三种基因型,纯合体中只扩增出一条298 bp片段,阴性材料中只扩增出一条787 bp片段,杂合体中同时扩增出298 bp片段和787 bp片段。该体系的建立为利用TT51-1进行抗螟虫水稻分子育种提供了一个简便有效的基因鉴定技术。
作者:代玉立; 甘林; 滕振勇; 杨静民; 祁月月; 石妞妞; 陈福如; 杨秀娟 期刊:《中国农业科学》 2020年第03期
【目的】由大斑突脐蠕孢(Exserohilum turcicum)和玉蜀黍平脐蠕孢(Bipolaris maydis)引起的玉米大斑病和小斑病是玉米生产上重要的叶部真菌病害,本研究旨在建立玉米大斑病菌和小斑病菌交配型多重PCR检测方法,为玉米大斑病菌和小斑病菌的交配型田间分布和有性生殖研究提供技术方法。【方法】根据GenBank中已登录的玉米大斑病菌(登录号MAT1-1:GU997138和MAT1-2:GU997137)和小斑病菌(登录号MAT1-1:X68399和MAT1-2:X68398)交配型基因序...
作者:王胜佳; 郭玉洁 期刊:《科学技术创新》 2019年第36期
呼吸道感染是全球范围内人类发病和死亡的主要原因之一,急性呼吸道感染中90%-95%是由病毒引起的,具有传染性强、传播快、潜伏期短、起病急、易继发细菌感染等特点[1]。呼吸道病毒是指主要由呼吸道为传播途径,侵犯呼吸道黏膜细胞并引起呼吸道局部感染或呼吸道外组织器官感染的一类病毒。呼吸道病毒主要包括流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒,腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、人类偏肺病毒及博卡病毒等。常见的呼吸道病毒感染往往呈现...
作者:赵睿骁; 韩斐; 江明锋; 曾莲; 韩嘉钰; 黄盈; 周航 期刊:《生物技术通报》 2020年第01期
旨在利用PCR-膜芯片技术快速高效的鉴定牦牛及犏牛肉制品的真假。采集样品(猪、山羊、黄牛、水牛、牦牛、鸡、鸭、兔、狗、真犏牛、假犏牛肉样各8个,19个肉干制品样品),提取并纯化DNA,利用11对特异性引物进行多重PCR,将扩增产物与含有12个探针的膜芯片反向点杂交,测试膜芯片的准确度及灵敏度,并鉴定市场上销售的牦牛肉制品真假。结果表明,膜芯片准确度高,特异性强,无交叉反应,灵敏度能达到0.1 ng,检测灵敏度高。通过鉴定市场上销售...
作者:陈冉越; 周庆; 王昱; 聂福平; 唐昌杰; 杨俊; 吴蕊; 刘莲; 张欢; 李贤良; 李应国; 王国民 期刊:《食品安全质量检测学报》 2019年第19期
目的建立单管同步快速鉴别水牛、黄牛、牦牛、山羊、驴和鸭的物种成分的多重PCR鉴别方法。方法对水牛、黄牛、牦牛、山羊、驴和鸭的线粒体全基因组,采用Primer-blast在线软件,设计6对特异性引物,优化反应条件,建立PCR体系。结果该方法仅对水牛、黄牛、牦牛、山羊、驴和鸭肉有特异性扩增,与其他动物的核酸无交叉反应;同时检测6种物种成分的检测低限为10-4 ng/μL。在鸭肉中分别模拟掺入牛肉、羊肉和驴肉成分,方法对鸭肉中掺入牛成分...
作者:戴莹; 雷亚克; 岳苗苗; 胡兵 期刊:《中国病原生物学》 2019年第11期
目的研究新型中药制剂对疟原虫的杀伤及对宿主的免疫影响。方法应用将多重PCR扩增和液相芯片检测技术检测埃博拉病毒(EBV)、拉沙热病毒(LFV)、裂谷热病毒(RVFV)、马尔堡病毒(MRBV)、克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)、中东呼吸综合征病毒(MERSV),为相关输入性烈性传染病的检测提供一种技术储备。方法建立6种相关病毒的多重PCR扩增反应体系,分别用每种病毒特异性核酸探针与不同编码的荧光微球进行偶联,将PCR扩增产物与偶联有不同核酸...
作者:陈少彬; 何子毅; 陈庆恺; 刘泽民; 王庆 期刊:《中国输血》 2019年第10期
作者:杨伟国; 徐辉 期刊:《甘肃中医药大学学报》 2013年第01期
目的了解甘肃省4个民族丙型肝炎病毒(HCV)感染的分布特征及变异趋势。方法对甘肃省4个民族HCV感染的患者样本用实时荧光定量PCR进行病毒载量的确定,并对病毒载量大于103的样本用多重PCR进行HCV的基因分型。结果甘肃省汉族、回族、藏族及东乡族HCV感染主要以1b型为主,其次是2a型和2c型;在汉族、回族2个民族中检出3a型,藏族和东乡族中未检出;不同民族间1b型、2a型HCV感染比例比较差异无统计意义(P〉0.05);在东乡族和藏族中发现了...
作者:王磊; 万雪; 王鹏; 段会勇; 马保臣; 柴同杰 期刊:《家畜生态学报》 2005年第05期
采用多重PCR对从流行过魏氏梭菌病的牧场粪便样品中分离魏氏梭菌的α、β、ε、ι毒素基因进行了检测,确定了血清型.电泳成像显示,仅魏氏梭菌扩增出了特异性条带,其他对照菌株无,说明该方法具有很高的特异性.通过对山东德州、枣庄、泰安、临沂、青岛等地养殖场的418个样品分离的62个菌株的检测,检出率为14.8%,均为A型.研究确认,多重PCR是魏氏梭菌血清型鉴别的一种快速、简便的研究方法,山东省流行型别与国外报道不完全一致.
作者:杨少华; 王洪梅; 高运东; 柴同杰; 仲跻峰 期刊:《家畜生态学报》 2006年第02期
本研究建立了一种同时检测大肠杆菌和魏氏梭菌的二重PCR方法,根据兔肠致病性大肠杆菌(REPEC)的eae毒力基因和魏氏梭菌的α—toxin毒力基因的基因文库,设计了两对分别与eae基因和α—toxin基因互补的引物,用这两对引物对同一样品中的REPEC和魏氏梭菌模板进行二重PCR扩增。结果均得到了两条特异性大小与试验设计相符的833bp(REPEC)和324bp(魏氏梭菌)的扩增条带,而对其它3种病原菌的PCR扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明...
作者:刘洋; 李俊; 时建立; 孙文博; 徐绍建; 吴家强; 李坤; 于江; 王金宝; 周顺 期刊:《家畜生态学报》 2010年第05期
根据GenBank中已发表的猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)等3种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PPV VP2、PRVgB、PCV2ORF1基因的保守区为各病毒的诊断靶序列。在建立各病毒单重PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了三种病毒的多重PCR技术。用78份临床病料对本研究多重PCR技术和单重PCR技术进行对比验证,结果显示,总符合率为97.4%以上。该方法特异性强、敏感性高,为PPV、PRV...
作者:俞向前; 王婷婷; 潘世友; 文德亮; 沈家红; 沈尧欣; 朱建国; 叶承荣 期刊:《畜牧与兽医》 2018年第09期
根据相关文献以及Gen Bank设计真菌的特异性引物,通过引物、退火温度及时间的优化,建立犬小孢子菌(Mc)、石膏样小孢子菌(Mg)和厚皮马拉色菌(Mp)的多重PCR检测方法,用于犬皮肤病病原真菌的快速检测。经特异性和灵敏性检测后,对浦东地区宠物医院采集到的38份疑似病例样品通过真菌培养后提取DNA进行检测。结果:所建立的多重PCR方法稳定性好,可有效区分3种常见的犬皮肤病原真菌,扩增出290 bp(Mc)、460 bp(Mg)和582 bp(Mp)...
作者:祝丽晶; 潘艳; 陈小颖; 侯盼飞 期刊:《中国实验诊断学》 2019年第11期
目的建立B族链球菌(Group B Streptococcus,GBS)鉴定及克林霉素、红霉素耐药性检测的多重PCR反应体系,为快速筛查和临床治疗提供依据。方法以cfb基因、ermB基因和linB基因为靶点设计引物,构建B族链球菌快速筛查和克林霉素、红霉素耐药检测的多重PCR反应体系,并对反应条件进行优化。结果成功构建GBS筛查和药敏的PCR反应体系,56℃为最佳退火温度。结论本研究建立的GBS鉴定、耐药性检测为一体的多重PCR体系,对围产期GBS筛查、临床治疗...
作者:张鑫; 王福; 陈美君; 刘飞; 潘欢欢; 陈鸿平; 刘友平 期刊:《时珍国医国药》 2015年第12期
目的建立一种快速、高效的鉴别金钱白花蛇(银环蛇)与三种常见混伪品的多重PCR方法。方法采用动物DNA提取试剂盒提取金钱白花蛇、赤链蛇、赤链华游蛇与金环蛇DNA;根据各样品COI(动物线粒体细胞色素b基因)序列设计4对不同长度的特异性引物,建立并优化多重PCR反应体系,通过电泳检测扩增产物分子量差异实现4种蛇类的快速鉴别。结果针对金钱白花蛇、赤链蛇、赤链华游蛇与金环蛇所设计的4对引物分别扩增出136、195、244和315bp的目的...
作者:刘桂香; 易虎; 田登; 赵生仓; 杨维成; 徐琼; 石燕; 张华一 期刊:《中国妇幼保健》 2013年第04期
目的:对2011年西宁市腹泻病毒进行流行病学调查,对青海省腹泻病毒流行株和流行趋势进行统计分析,为腹泻病毒引起的腹泻提供实验室资料,更好地控制病毒性腹泻的流行。方法:用巢式PCR和多重PCR方法对两宁地区488例婴幼儿腹泻标本进行腹泻病毒检测。结果:西宁地区腹泻儿童中腹泻病毒的检出率分别为:轮状病毒A组阳性33例(6.76%),其中G。型15例、G,型13例、P。型1例、P。型2例、R型2例;轮状病毒B/C组阳性3例(0.61%)...
目的建立解脲支原体(urealytium;Uu)、人型支原体(mycoplasma hominis,Mh)、生殖支原体(mycoplasma genitalium,Mg)多重PCR检测模板,为临床泌尿生殖道支原体感染的筛选及检测提供便利的多重PCR方法。方法采用Uu、Mh、Mg提取目的RNA,采用定量荧光PCR技术进行目的基因扩增,进行纯化回收后构建多重PCR检测模板,对构建条件进行优化组合,并对临床样本进行检测,评价多重PCR检测的灵敏度。结果建立多重PCR模板最优扩增条件...
作者:魏春霞; 孙淼; 赵炜; 陈延飞; 刘怀东; 张敏; 李岭; 陈建; 才学鹏; 曾巧英; 薛青红 期刊:《中国兽药》 2019年第04期
针对现有牛病病原检测方法指标单一,操作复杂的现状,拟建立一种可高效检测牛布鲁氏菌病、结核、炭疽、口蹄疫、病毒性腹泻黏膜病、副流感、传染性鼻气管炎的基因芯片技术。根据已公布的各病原核酸序列,设计引物和探针。利用多重PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针特异性杂交,芯片反应显色后肉眼观察进行检测结果判定。优化反应条件、建立检测方法,同时对检测方法的灵敏度、可重复性、特异性、保存期等进行评价。结果显示,该基因芯...
作者:龚玉梅; Pat; Blackall; 陈卓明; 苗得园; 孙惠玲; 张培君 期刊:《中国兽药》 2004年第02期
建立了一种简单且具有型特异性的产气荚膜梭菌的多重PCR诊断方法.结果表明,该PCR特异性好,只有产气荚膜梭菌呈现阳性,被检验的其他7种梭菌以及大肠杆菌、葡萄球菌和多杀性巴氏杆菌均为阴性.该PCR具有较高的敏感性,最小检测量为4.2×105 CFU/mL,单个菌落稀释10倍后也能被检测出,适用于医院、防疫和兽医诊断等部门,具有重要的公共卫生意义.
作者:张阁; 彭永; 刘国权; 蒋卉; 冯宇; 朱良全; 丁家波 期刊:《中国兽药》 2017年第10期
为建立禽分枝杆菌多重PCR鉴定方法,根据国外报道的诊断方法设计4对特异性引物,选用我国禽结核参考菌株(CVCC 68201)基因组DNA为模板,优化了退火温度,测定了DNA最小检测量,并进行了特异性检验。采用优化好的多重PCR体系,对国家兽医微生物菌种保藏中心保存的禽分枝杆菌标准菌株进行检测和分类。实验结果表明,禽结核参考菌株(CVCC 68201)能很好的扩增出577 bp(IS901基因片段)、385 bp(IS1245基因片段)和140 bp(dna J基因片段...