摘要：为建立检测副猪嗜血杆菌（H.parasuis）抗体方法，本研究以H.parasuis外膜蛋白Omp16为包被抗原建立了检测H.parasuis的间接ELISA方法。反应条件经优化为：抗原包被浓度为1 μg/mL，血清稀释度为1：80；血清与抗原最佳作用时间为40 min，二抗稀释10 000倍，与一抗孵育30 min；TMB作用时间为30 min。利用该ELISA方法检测H.parasuis、胸膜肺炎放线杆菌、大肠杆菌和猪链球菌2型等血清，除H.parasuis为阳性外其余均为阴性，表明其特异性强。该ELISA方法可检测到最高稀释度为1∶512的阳性血清，敏感性高。重复性试验显示，其批内和批间的重复试验变异系数（CV）分别在3.62 %～8.97 %和4.3 %～9.50 %。该ELISA检测方法与进口ELISA试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和总体符合率分别为87.8 %，90.7 %和88.6 %。本研究建立的间接ELISA方法，为H.parasuis血清流行病学调查及疫苗免疫评价等提供了重要手段。

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