摘要:根据已报道的LRP16启动子序列(2.6kb),采用PCR反应获得6个启动子5′删除突变体,分别插入pGL3-Basic载体,构建6种5′缺失报告基因表达载体(pS1~pS6),分别与ERα真核表达载体共转染MCF-7细胞,用双荧光素酶报告系统测定荧光素酶活性,以明确LRP16基因上游启动子区域中的雌激素反应序列.结果显示,pS1~pS6均有雌二醇反应性,进而对pS5的3′端缺失分析发现LRP16基因翻译起始位点上游-214至-251位置的序列具有雌激素应答,序列分析发现该片段序列中包含了一个供转录因子Sp1结合的GC富含位点和一个ERα反应元件的半位点(1/2ERE/Sp1),进一步突变分析显示这两个元件均为雌激素反应性所必需,以含这两个顺式元件的序列(-253bp至-224bp)作为探针,超级迁移凝胶电泳试验结果表明了ERα和Sp1蛋白均可以和探针结合,研究发现了雌激素上调LRP16基因表达的一个增强子元件-1/2ERE/Sp1,ERα和Sp1蛋白需要与DNA结合形成复合体,通过其相互作用激活转录。
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