作者:周辉芳; 隗和儒; 马士朝; 张超群; 王君平; 杨新英; 谢英; 孙殿兴 期刊:《临床肝胆病》 2020年第02期
商品化质粒小量抽提试剂盒制备的质粒DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测可见2条亮带,分别回收2条亮带,使用限制性内切酶分别消化,再用琼脂糖凝胶电泳检测,依据质粒的亚型(超螺旋、线性、开环)在以琼脂糖凝胶为介质的电场中的移动速度不同,鉴定出制备的质粒DNA电泳图中的2条亮带分别是超螺旋质粒和开环质粒。
作者:王友如 期刊:《湖北师范大学学报·哲学社会科学版》 2006年第03期
对于Ecoli菌株用8种不同浓度的CaCl2制备感受态细胞,然后转化各浓度的感受态细胞。实验结果表明,不同浓度CaCl2溶液处理所得到的感受态细胞,其转化效率有很大的不同。随着CaCl2浓度增高,转化效率也随之提高,在80mmol/L~100mmol/L时达到峰值,进一步提高CaCl2的浓度,转化效率急剧下降。还探讨了-70℃贮存时间对转化效率的影响。
作者:张一林; 贺迎坤; 李天晓; 刘刚; 胡延忠; 崔秀坤 期刊:《中华介入放射学电子》 2019年第01期
目的:构建可涂布于介入器械的人血管内皮生长因子(VEGF)真核表达载体。方法:根据人VEGFA(NM_001025366)目的序列设计引物制备目的基因及载体,双酶切载体pIRES2-ZsGreen1和目的基因homo VEGFA进行连接后转化入大肠杆菌,构建质粒pIRES2-ZsGreen1-homo-VEGFA并测序鉴定。结果:目的基因VEGFA已连接到载体pIRES2-ZsGreen1,大小约1400 bp,与人VEGFA(NM_001025366)目的序列比对结果一致,未见变异。质粒pIRES2-ZsGreen1-homo-VEGFA构建成功...
作者:李莉萍; 罗超权; 张志珍; 梁念慈 期刊:《广东医科大学学报》 2010年第01期
目的探讨存活素siRNA表达质粒(mU6/survivin质粒)对化疗药物抑癌作用的影响。方法采用MTT法检测mU6/survivin质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的联合作用。结果比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点,siRNA表达质粒mU6/survivin与化疗药物顺铂、环磷酰胺、5.氟尿嘧啶或秋水仙碱合用组对肿瘤细胞MCF-7的细胞增殖抑制率均明显提高,差异均有统计学意义(P〈0.01);对靶向DNA药物如顺铂、环磷酰胺和5-氟尿嘧...
作者:洪伟; 赵行行; 吴昌学; 饶凤琴; 程玉梅; 张婷; 齐晓岚; 禹文峰; 官志忠 期刊:《贵州医科大学学报》 2019年第12期
目的:使用嗜热二型内含子基因失活系统(Thermotargetron)失活人肠道来源大肠杆菌(HSM174 DE3)β-半乳糖苷酶基因(LacZ),构建lacZ失活突变株。方法:使用分子克隆方法,构建lacZ基因失活质粒pHK-TT1A-lacZ426a、pHK-TT1A-lacZ1879a、pHK-TT1A-lacZ1880a及pHK-TT1A-lacZ1155s,将基因失活质粒转化大肠杆菌HSM174菌株(E.coli HSM174),转化子培养时提高温度至48℃,诱导TeI3c/4c二型内含子“归巢”活性,采用蓝白斑及PCR筛选lacZ基因失活突变...
作者:陈凡; 傅一勤; 林梅西; 汪少芸 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2018年第01期
基因突变对生命的进化具有重要意义,针对质粒的DNA定点诱变技术也是基因工程、蛋白质工程研究中的重要手段之一。为了提高质粒定点诱变的效率,本研究利用引物部分重叠的设计方案,使用Tm值相对固定的引物设计模式,将同一引物分为重叠区(Tm=50±2℃)和非重叠区(Tm=60±2℃),并在严格控制模板用量(2 pg/kb)的基础上,通过20个PCR循环对目标质粒进行定点诱变扩增,随后取0.5μL产物直接用于转化。在Fast Pfu Fly酶系中,利用此法构建了...
作者:韩仁如; 胡付品 期刊:《中国感染与化疗》 2019年第06期
1引言碳青霉烯类抗生素对超广谱β内酰胺酶(ESBL)和头孢菌素酶具有高度的稳定性,但可被碳青霉烯酶水解、灭活,随着临床治疗药物的广泛应用,产生了耐碳青霉烯类的菌株,这给临床抗感染治疗带来了严峻的挑战[1]。近年来,耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的比率增加,特别是耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)比率增加。
作者:吴玲玲; 王祖华; 刘纪; 杨迪; 冯梓龙; 余春芳; 金志雄 期刊:《中国病原生物学》 2019年第08期
作者:孔明圣; 于洋; 张亚倩; 李玲; 张文峰; 邵红伟 期刊:《广东药科大学学报》 2019年第02期
目的分析影响质粒转染人PBMC电穿孔效率的不同因素。方法从人外周血中分离得到PBMC,利用携带荧光标记的质粒进行电穿孔转染。分别比较不同的电压、脉冲时间、电转缓冲液、细胞培养状态、质粒质量对转染效率和细胞活率的影响。结果在一定范围内适当增高电压会增加细胞转染效率,但会降低细胞活率;脉冲时间达到一定数值后,转染效率才会有明显的升高;电转缓冲液对于电转后细胞存活率至关重要;未活化的PBMC转染效率低于经刺激活化的PBMC...
作者:孙绍娟; 王鸿程; 许学亮; 孔志斌; 简丽萍; 曹兵 期刊:《西南医科大学学报》 2007年第01期
目的:构建含人STAT3基因不同位点的一系列siR.NA真核表达质粒pSUPER.,并进行测序,为以STAT3为靶点的肿瘤基因治疗研究奠定基础。方法:将人工合成的针对STAT3基因2个不同位点经基因重组定向克隆插入到真核表达质粒pSUPER.中,通过PCR.检测及质粒测序确定重组结果。结果:各对mRNA序列均按正确方向插入pSUPER.质粒。结论:成功构建了含人STAT3基因2个不同位点的siRNA真核表达质粒。
马红球菌是1~6月龄马驹最严重的致病菌,其中质粒的致病区蛋白是马红球菌的致病必要因素,并在免疫调节过程中发挥重要的作用。文章就马红球菌携带的致稿质粒及其编码的致病蛋白的研究进行综述,为了解马红球菌病的致病及预防提供参考。
质粒生物学 质粒是染色体外可以进行自我复制的遗传元件,广泛存在于各类生物体的细胞中。质粒对于分子生物学的发展及生命现象的揭示发挥着不可替代的作用。本书是关于质粒的百科全书,内容涉及质粒的研究历史,质粒的复制、分配和转移.质粒的生态学和进化等,质粒用作遗传工具等.还专门讨论了一些重要类型的质粒。体现了下列特色:对质粒复制、分配和转移的机制细致入微的分析:
弗兰克氏菌(Frankia)能够与大约25个属的非豆科植物共生进行结瘤固氮,在生态系统中具有重要意义.本文对Frankia的基因组学研究进展进行了综述,包括Frankia基因组的结构、功能及其表达特点,同时比较了来源于不同菌株的固氮基因的差异,并提出今后的发展趋势.
作者:彭伟; 刘慧铭; 梁露群; 伍聪聪; 徐卫卫; 周星丞; 王圆圆; 刘丽荣; 桂华珍; 郭兵 期刊:《贵州医科大学学报》 2018年第10期
目的:研究尾静脉注射骨形成蛋白7(BMP-7)过表达质粒在小鼠心、肝、肺和肾脏组织中的表达及其安全性。方法:将30只小鼠随机分为正常组(NC组)、空载质粒组(NC+Vector组)以及BMP-7过表达质粒组(NC+BMP-7组),NC+BMP-7组和NC+Vector组分别通过尾静脉注射BMP-7过表达质粒或空载质粒,每周1次共注射6周,6周后处死小鼠取动脉血,检测血清中小鼠胆固醇、甘油三酯和血糖含量,收集小鼠心、肝、肺和肾脏组织,采用HE染色观察小鼠肝...
作者:金培生; 沈才齐; 李雪阳; 张爱君; 陶常波; 李强; 马志兵 期刊:《徐州医科大学学报》 2012年第11期
目的构建结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)重组质粒,研究其在人皮肤瘢痕成纤维细胞中对CTGF基因表达的沉默效果,为探讨病理性瘢痕的基因治疗奠定基础。方法设计针对人CTGF基因特异性的3条siRNAoligo,通RT—PCR及Westernblot检测其在瘢痕成纤维细胞中的干扰效果,从中筛选出一条最佳片段。根据所筛选出的最佳片段序列设计并构建CTGF—shR—NA质粒,通过单酶切和测序...
作者:李振宇; 徐开林; 潘秀英; 鹿群先; 陈香梅; 何徐彭 期刊:《徐州医科大学学报》 2004年第04期
目的研究氯化铷法制备感受态细胞的转化效率和不同条件对其的影响.方法采用氯化铷法制备感受态细胞,用不同的质粒进行转化.分析不同菌种、冻存时间对转化效率的影响,并与通常所使用的氯化钙法进行转化效率的比较.结果氯化铷法制备感受态细胞可用于不同的质粒的转化,对于同一种质粒,不同的菌种和冻存时间对转化效率无影响,其转化效率高于氯化钙法.结论氯化铷法制备感受态细胞是一种可以长期保存而不影响转化效率的方法.
作者:陈筑; 刘建国; 马欣荣; 张燕; 唐琳; 吴家媛; 张剑 期刊:《口腔疾病防治》 2012年第09期
目的构建含变异链球菌葡糖基转移酶多个免疫显性抗原表位的植物表达质粒p2355-gtfB,为其转化植物研究奠定物质基础,为可食防龋疫苗研究提供条件。方法以真核表达质粒pcDNA3-gtfB为模板,通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增含编码变异链球菌葡糖基转移酶抗原表位的目的基因gffB。将回收纯化的PCR产物经T-A克隆技术克隆于中间载体pMD18-T,双酶切鉴定插入方向后,将目的基因从中间载体释放,再克隆至高效的植...
作者:付强; 李友瑞; 徐亚娟; 张艺平; 沈韵; 吴昌敬 期刊:《口腔疾病防治》 2009年第09期
目的研究直接转染化学合成小分子干扰核糖核酸(small interfering ribonucleic acid,siRNA)和通过质粒转导后在细胞内合成siRNA两种方法转染小鼠成骨细胞的转染效率,并优化实验条件。方法从无特定病原体(specefic pathogen free,SPF)级BALB/c新生鼠取材进行成骨细胞原代培养,经碱性磷酸酶(alkaline phospha-tase,ALP)和矿化结节检测鉴定为成骨细胞后传代至第3代,接种至24孔培养板。使用化学合成的经羧基荧光素标记的siRNA和...
作者:米涌; 郭跃华; 鲍世韵 期刊:《中国全科医学》 2006年第04期
目的应用载体介导的RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制甲状腺癌细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达。方法构建利用U6启动子转录功能性小干扰RNA(siRNA)的质粒载体,对阳性克隆进行酶切和测序鉴定后,转染人甲状腺癌FRO细胞,利用RT—PCR和Weston blot法检测hTERT基因的表达情况。结果构建的表达质粒转染FRO细胞后,hTERT基因mRNA和蛋白质的表达水平明显降低,抑制率分别为76%和81%。结论siRNA的表达质粒能成功抑制甲状腺...