如Rh血型阴性的母亲怀第二胎时为什么会发生新生儿溶血？过敏性哮喘患者为什么是呼气性的呼吸困难？交感性眼炎一眼破裂为什么另外一眼也会发炎甚至失明？角膜移植为什么是迄今为止最成功的移植手术？从现象到本质，将学生的感性认识转变为理性认识，将临床疾病与理论知识结合起来，开阔学生的知识视野，使学生感到学以致用，调动学生的学习积极性和主动性，以取得良好的课堂教学效果。
二、联系实际生活活化课堂教学内容激发学生学习兴趣
理论与实际有机结合，可以避免抽象理论知识短期内遗忘的情况，经常列举一些与日常生活密切相关的例子，不但能使抽象的理论变得浅显易懂,而且能使学生通过思考记忆医学免疫学知识。如把抗原比做免疫系统识别的敌人，抗体比做捕捉敌人的武器，补体为一个连环机关，B细胞为武器生产专家，抗原呈递细胞为侦察兵等，利用生活中的形象代替生疏的专业名词，可以让学生听得懂、记得牢、感兴趣。HLA教学中涉及亲子鉴定，而电视剧里滴血认亲是否有科学依据？DNA鉴定时检测哪些基因？为什么要检测这些基因？在讲授免疫预防知识时可先提问学生都接种过哪些疫苗，预防哪些疾病，从而吸引学生注意力。在讲授5类免疫球蛋白特征时，提出问题：为什么提倡母乳喂养？婴儿出生6个月后为什么易感染、易高热？通过联系实际生活，使学生了解知识与生活关系密切,既活跃了课堂气氛、加深了记忆，又培养了学生发现、思考、解决实际问题的能力。联系其他学科，融会贯通，加深学生对医学免疫学知识的理解医学是一门系统学科，涉及面广，知识量大。学习初期，医学生很难把各学科知识融会贯通，而要想充分理解并掌握医学免疫学知识，必须联系其他相关学科。如免疫器官涉及解剖学，教学中应先复习骨髓、胸腺、淋巴结等解剖学知识；免疫细胞与组胚生理相关，教学中先让学生回忆血细胞的组成，然后引入淋巴细胞。在讲授补体介导炎症反应时，可以和学生一起回忆病理课上讲的炎症反应，并加入补体内容，使学生对炎症反应有一个完整的印象。这样既有助于知识的横向联系，又有利于新知识点的掌握。
三、采用灵活多变的教学方法,优化教学过程
1.化繁为简如抗原概念教学中采用关键词提取法，提取刺激和结合两个动词，就可以把这个概念理解透彻，又可以对应抗原的两个基本特性：免疫原性（对应刺激）和抗原性（对应结合）。主要组织性抗原提呈抗原的功能可用“Ⅰ内8，Ⅱ外4”概括。即HLAⅠ类抗原识别和提呈内源性抗原，提呈给CD8+阳性的T细胞；HLAⅡ类抗原识别和提呈外源性抗原，提呈给CD4+阳性的T细胞。用简单6个字就可以把易混淆的知识点记牢记清。画图教学在免疫球蛋白结构教学中，让学生和教师一起画免疫球蛋白示意图，并标明免疫球蛋白N端、C端、VL、CL、VH、CH1/2/3、二硫键等，评选出正确标注并且美观的示意图，这样既可以避免多媒体教学动手少的弊端，又可以活跃课堂气氛。
2.教材调整医学免疫学课程内容庞杂,为易于学生记忆和掌握,学以致用，应根据专业需求、学生理解水平等对教学内容、教学顺序给予重新编排。如临床免疫学教学中，对于临床医学专业学生重点讲解相关疾病的机制、临床表现及防治，而对于护理专业学生则应强调护理相关患者时的注意事项。医学免疫学发展迅速，对于起点较高的学生可适当加入免疫学新进展；对于起点较低的学生，由于其理解能力稍差，应删除教材中一些与临床关系不大且难理解的知识点，如T细胞阴性选择、阳性选择等。这样有所选择的讲授,既减轻了学生的负担,又利于学生后续课程的学习。
四、结语
英文名称：International Journal of Immunology
主管单位：中华人民共和国卫生部
主办单位：中华医学会;哈尔滨医科大学
出版周期：双月刊
出版地址：黑龙江省哈尔滨市
语
种：中文
开
本：16开
国际刊号：1673-4394
国内刊号：23-1535/R
邮发代号：
发行范围：国内外统一发行
创刊时间：1978
期刊收录：
CA 化学文摘(美)(2009)
核心期刊：
中文核心期刊(2008)
中文核心期刊(1992)
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期刊简介
[关键词] 免疫学 教学改革 以人为本 学科交叉 合作性学习
在生命科学飞速发展的今天,作为生命科学三大前沿学科的免疫学,近几十年来越来越受到人们的重视。随着细胞生物学、生物化学、分子生物学的不断进步,大大推动了免疫学的发展。目前,免疫学研究已经深人到了分子生物学水平,使过去许多悬而未决的临床疾病的发病机制问题得以阐明,为进一步治疗提供了理论基础。但是免疫学作为一门前沿学科,发展迅速,日新月异,理论抽象,对学生而言,难学、难懂、难记。此外,其各章节的内容具有相对的独立性,学生学起来更是枯燥乏味、困难重重。为此,如何使其内容由难变易、由抽象变具体、由深奥变浅显,是免疫学教师在教学上进行不断探求,不断改革的宗旨。如何适应当代免疫学发展的要求,针对免疫学知识体系的特点,有效地提高免疫学教学质量,成为教学的关键。笔者将免疫学教学改革设想大致分为三个方面,即备课、授课及实践。
一、备课方式改革――集体备课,合理制定授课计划
集体备课,能够使教师集思广益,通过研讨促教学,最终形成资源共享。集体备课在我国基础教育课程中久已通行,对全国中小学教师而言已经是教学活动的常规。而大学中集体备课活动经验较少。免疫学是一门与其他生物学科,临床医学学科广泛交叉的前沿学科。学科知识覆盖面广,内容更新快,深奥抽象,通过免疫学教学实践“教”与“学”皆不易便是教师和学生最深的体会。由于教学课时少,如何取舍教学内容,采取何种教学方法都给教师的个人备课和教学带来不小的困扰。通过集体备课,正确分析教材,针对各部分特点制定授课计划,便于集思广益解决教师个人解决不了或解决不好的问题,使教师向备课的“互补创新型”转换,形成“资源共享”。集体备课能形成良好的教研风气,让每一个参与者收获更多的思想和方法,这正是集体备课的价值所在。
二、授课方式改革
现代教育理念是把发掘人的潜力,开发人的聪明才智作为出发点和落脚点。那就必须积极探索,实施一系列教育改革的措施。
1.“温故知新”,注重引导学生
针对免疫学理论抽象性强的特点,还要在每次讲新内容之前.采用回顾式教学方法帮助学生温习上次授课内容,俗话说“温故知新”。在温故的同时,将当天要学习的内容串联起来,甚至是串联多个内容。如学习抗体时,要与抗原联系在一起;学习免疫分子时可以与免疫器官、免疫细胞联系起来。抓住重点内容,重点阐述,甚至是多次重复、重现所学的知识点,以便学生能够更好地巩固、掌握所学的知识。
2.以人为本,充分利用高科技手段使教学方法多样化
免疫学是一门研究人体免疫系统的结构与功能、研究正常与疾病状态下免疫现象与机制的学科,具有较强的理论性和抽象性,仅用传统的语言教学难以完全表达清楚。以影音、图片、动画为主要表现形式的多媒体技术为新的教学模式的应用提供了有利条件。多媒体教学具有很强的直观性,可通过声、光、电技术将医学免疫学中的大量的信息具体化,使原本枯燥、抽象、平铺直叙的教学内容变得生动形象,栩栩如生。如:
⑴图解法。通过一个图解启示学生具有强烈的感性认识,使其更加容易掌握。例如,我们在讲解内源性抗原和外源性抗原的概念以及区别时,如果只是讲解内源性抗原由自身细胞合成,而外源性抗原则是外界物质入侵,就会显得有些抽象。这时我们可以结合多媒体课件上的图1来讲解,这样就比较便于学生理解和记忆。
⑵箭头示意法。很多免疫学术语对我们初学者来说比较陌生,抽象深奥,同学们理解起来有一定难度。因此,为了将难于讲解和理解的内容转化成易于讲解和理解的内容,我们采用了箭头示意法来对其进行讲解。如,我们举例同一种抗原再次进入机体,我们就采用了如图2的箭头示意法。
在讲课导入新课的过程中,多次介绍本系统的框架,从整体去阐述部分,再从各部分又回归到整体。这样,每一次上课的内容都不是孤立的、单一的,可以帮助学生整理思维过程,使学生的思路沿着教师的引导逐步深入;同学反映容易理解、易于接受。
⑶临床思维法。免疫学理论知识繁多,如果不能与临床相联系,就会导致教师教之枯燥,学之乏味。为消除这种弊端,我们在进行免疫学教学时,应尽可能做到理论联系实际。基础免疫联系临床免疫,密切结合临床讲解免疫学知识,这样就会更加凝聚学生的好奇感。例如,讲到淋巴细胞中的恶性淋巴瘤,恶性淋巴瘤(m alignantlymphomas)原发于淋巴结和其他器官中淋巴组织的恶性肿瘤。由淋巴细胞、组织细胞的恶性肿瘤性增生引起。根据病理学特点的不同,分为何杰金氏病(HD)和非何杰金氏淋巴瘤(NHL)两大类。HD又分为淋巴细胞为主型、结节硬化型、混合细胞型和淋巴细胞耗竭型(此型预后最差)等4种类型。而NHL尚无统一的分型,多按形态学、免疫学标志和恶性程度相结合分为低、中、高恶性3组,每组又分若干型。临床根据病变的范围分为4期,一般说Ⅰ～Ⅱ期低度恶性者疗效和预后较好。本病在中国并不少见,死亡率居恶性肿瘤的第11位,可发生在任何年龄,以青少年多见,以NHL居多,HD发生率明显低于欧美国家,与日本相似。发热、盗汗、消瘦和全身淋巴结及肝脾肿大为本病主要表现,确诊要靠淋巴结病理检查,胸片、B超和CT等检查可判明深部淋巴结肿大,有助于临床分期,诊断时有全身症状者为B,否则为A。一般治疗原则是:HD的Ⅰ、Ⅱ期和部分Ⅲ期A及NHL的Ⅰ、Ⅱ期病人以放射治疗为主,适当加联合化疗;HD的Ⅲ期B和Ⅳ期及NHL的Ⅲ、Ⅳ期病人应以联合化疗为主,辅以局部放疗。有条件者可做自体骨髓移植加强烈化疗,可望治愈。
总之,在具体教学实践中,教师不应拘泥于某种教学方法,而应有针对性地根据不同授课内容对象,选择一种或多种教学方法。从而充分激发学生的学习兴趣和主动性,让学生理解消化课堂上的内容,实现以学生为本的教学原则。
3.学科交叉,注重培养学生联系的思维方法,帮助学生消化免疫学理论
生物学各个学科之间存在着紧密的联系,形成了一个立体网络。如果将任何一门学科孤立看待,学生在理解上就会存在一定困难,而且很难将所学的知识融会贯通。免疫学课同样如此,它的许多理论需要其他课程的知识才能充分理解,同样其他学科肯定也要用到免疫学知识。比如,在讲解MHC分子这一章时,学生普遍反映很难理解。我们分析了症结所在,就是这一章的学习需要学生对生物学及遗传学的知识有很好的掌握,但学生大约是在一年前学的这两门课,对知识的记忆已比较模糊,上课时对一些概念反应不过来,影响了对教学内容的理解。课前要求学生对相关知识进行复习,在讲解这一与基因密切相关的难点课程时,会达到事半功倍的效果。同时这一章与临床医学有密切的关系,而临床知识往往是学生非常感兴趣的话题,器官移植是现实生活中常常遇到的医学话题,而MHC与器官移植有着密切的关系,通过重点讲解MHC与器官移植的关系,引发了学生的学习兴趣,加深了学生对难点的理解。
4.与时俱进,加强理论与实际相互结合,不断更新丰富教学内容
免疫学教学内容有很强的逻辑性和综合性,在教学中各章节内容相互交叉和渗透较多,学生学习起来难度较大。前半部分主要是免疫学基础理论,它是后面临床免疫的根基。我们在教学中了解到学生爱好听临床方面的实例,在教学中讲述相对抽象的基础理论时可以举相关病。利用生活素材,掌握知识本质,从而调动学生的积极性,而在后面把学生已感知到的临床现象与基础理论结合起来,从现象到本质,将学生的感性认识认识转变为理性认识。
5.科研思维,创新能力的培养和提高
随着我国教育体制由应试教育向素质教育的根本转变,根据高等院校对人才培养目标的要求,在教学过程中应重视培养学生的创新能力,而不仅仅只是传授知识,更重要的是开拓学生的思维,启发学生积极发现问题,在分析问题时还要尝试着提出一些新的见解或方法来解决问题。传统的教育模式是教师在教学活动中处于主宰地位,教师的任务是给学生灌输知识,而学生处于被动接受知识的从属地位,这样的教学形式死板,学生思考空间狭窄,结合各章节内容,综合分析问题的能力较差。如现今流行的探究式教学法是以启发引导学生自主探究式学习为主要形式,注重对学生创新思维能力的培养,让学生在自主摸索合作互动中通过质疑、实验、讨论、想象,产生顿悟,进而有所发现。学生运用已学过的知识和技能对新知识进行探素,主要通过发现问题、分析问题、解决问题的方式自己得到未知的结果,从而达到对新知识的掌握。
6.对应素质教学目标,丰富考核及评价标准
考核是学校教学工作的重要环节,是检验学生知识掌握程度的有效手段,也是教师进行有序教学的有力“杠杆”。针对素质教育的要求改革考核方式积极利用考试以外的其他方式进行考核,进而弥补单一考试评价的缺陷。我们免疫学考核方案为:平时成绩(20%),期未成绩(70%),实验成绩(10%)。这样的比例在过去看来足比较合理的,但是现在看来存在局限性.随着实验课程的增多,相应的考核分数比例应提高至少占到50%。平时成绩包括出勤率,学习态度等比例至少为20%,期未成绩为30%。通过这样一些措施,极大调动了学生学习的积极性和手动性,对培养学生动手能力和创新能力起到积极作用。
在学校转型的关键时期,为适应高校素质教育和培养高质量技能型人才的要求,作为一名高校教师在免疫学教学过程中,注重加强教学改革.提高教学质量,充分调动学生的学习积极性和创造性,激发学生主动学习的热情,并取得一定的效果。在今后的教学过程中,我们不断探索,深人研究,争取总结出更多、更好的经验。
三、实验教学改革――培养学生实践能力
实验教学是培养学生创新精神和实践技能的重要环节,通过实验使免疫学理论与实践相结合,培养学生动手能力、分析问题和解决问题的能力以及严谨求实的科学态度,同时可开拓学生的想象力和创造力。对此,我们增加了实用性强的实验,并注重实验内容的整体安排,改变过去重理论轻实验的错误认识,要想在理论上有所突破,必须先从实验入手。为培养既有一定理论功底又有专业技能的高素质专门人才而不断努力。比如:合作性学习。
合作性学习是当今全球范围内的一种较新的教学思想与策略根据医学免疫学学科特点,对抗原刺激机体后机体免疫系统不同成分参与免疫应答的复杂过程,采用合作性学习方法进行学习,最后以“话剧”表演方式汇报学习成果。这种方法可以激发学生学习兴趣和学习热情,提高学习成绩,培养学生间良好的合作关系和团队精神,使其发挥更大的创造潜能和合作积极性。其具体方法如下:首先,选择由教室商议选择一个有意义的合作主题,在进行合作学习之前,就向学生推荐需要阅读和了解的资料,如相关教材、期刊、网站等。其次,教师来确定学术目标和合作目标。通过分组方式,组员角色的分配,给学生提供课后交流的主题和机会,让学生承担起个人责任并相互依赖,不至于使很多学生在课后觉得孤单,无所事事,从而完成学习任务并达到目标。再次,检验合作学习效果的方法。在教师介入与监督下,随时给予学生提供指导和建议,这其实是一种教师与学生的合作,也是教师“传道、授业、解惑”职责的体现。最后,进行信息反馈。以话剧方式分组汇报学习成果,并可用计算机多媒体辅助,然后由评委点评并做自我总结。
综上所述,免疫学作为生命科学发展的前沿学科,以其广度上的多交叉、深度上的多层次、发展上的高速度成为沟通生物学和临床医学重要的桥梁学科。当代医学免疫学的发展日新月异,并和临床疾病的预防、诊断、治疗、发生、发展等诸多环节密切相关,我们通过对免疫学教学方法的探索和改进,希望能够形成了一套行之有效的教学模式,并能取得了良好的教学效果。在以后的教学中,我们将不断完善免疫学教学方法,形成鲜明的教学风格,博采众长,扬长避短,使教学质量更上一层楼。
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【关键词】临床医学；免疫检验；历史；解决方法
1 引言
伴随着世界经济与学技术的蓬勃发展，医疗技术的发展在现当代取得了一系列举世瞩目的成就，就临床免疫学检验工作而言，已成为现代医院诊疗工中不可或缺的重要组成部分。随着现代医疗诊断技术的不断发展，如何有效地对临床免疫检验的质量进行控制已直接影响到临床的诊断结果的准确性，同时也间接影响到最终地临床治疗效果。由于在整个标本采集的过程中免疫检验标本从采集到结果的检验需经历的环节较多，这就对临床医师对患者的生理、病理情况以及争端方法的熟悉程度及综合技能提出了很高的要求；
2 临床免疫学检验的建立与发展
临床医学免疫检验自建立至今已经历了一百个春秋。自从19世纪80年代后期开始，随着很多学者专家开始从免疫动物或者携带有传染病病毒的患者血清中发现有能够治愈患者疾病的特异性结合病原体或其一系列的衍生产物的物质，而这些物质及为我们现在所熟识的抗体。就现代医学理念来讲，将能够引起人体体内产生抗体的物质统称为抗原。正是由于抗原以及抗体的发现，才促使现代医学专家学者开始对人类或动物体外抗原刺激体内反应产生抗体这一现象进行系统深入的研究。随着免疫学理论以及分子生物学还有其它以现代科学技术为依托的新兴临床免疫学检验继能够有日新月异的发展。
3 提高临床免疫检验质量的方法
3.1标本采集与设备管理的优化
作为检验分析前对质量控制的要求来说，检验人员首先需要做到对标本的采集和保存工作；密切注意整个样本采集过程中的样本采集的时间、止血带的使用时间和方法、采血的姿势、抗凝剂和稳定剂的选用情况。免疫检验工作，首先要求检验人员注意对整个标本的采集和处理工作。不同的采样试验对所采集的标本的要求有所不同。对于大多数以病人血清为标本的免疫检验而言，采集血清的时间应在清晨被采集者未进食前为宜，保持针筒的干燥性，抽血完成后需要马上除去针头并将所采集到的血液注入到干燥的试管内，注意在整个注血过程中采样人员的注血速度不宜过快，不能对所采样本进行振摇等一系列不允许的动作，以防溶血。在将整个血清分离完成后，应及时送往检测，如需要求对所采试样进行保存的话，可将试样置于冰箱内冷藏，不宜速冻，以防止因为反复冻融而对整个检验结果产生不良的影响。作为对测定的血清标本的收集过程来说，激素类和治疗药物的使用要特别注意收集时间的变化以及检验人员的变化对整个测定结果的影响；其次，在采购人员对于相关仪器设备及试剂的选择方面也同样对整个测量结果有着十分大的影响；作为整个检验的执行者来说仪器设备性能的好坏将直接对检验结果的精确度造成非常大的影响。在整个检测结束后要注意地成套仪器的保养和维护工作，工作人员要经常对温度计、水浴箱、酶标仪、稀释棒、恒温箱、吸量管、分光光度计等临床免疫检验的仪器设备进行核定、校正以及检查等工作，从而确保仪器设备的使用性能，减少实验过程中因为仪器所引起的误差，继而来保证检验结果准确性的目的，最终为意识的治疗及患者的康复提供最有用的保障。对于当今品鱼龙混杂，质量不一的试剂市场来说，慎重选择且经常对试剂性能进行有关试剂的检定工作是保证检验成功的重要因素。
3.2 提高技术人员的素质
人是整个免疫检验过程中的主体，是整个免疫检验过程中最积极、表现最为活跃的因素。在免疫检验过程工作的所有环节，都需要靠人来对整个试验进行操作和把握，最终实现对整个临床免疫检验质量控制的目标。因此，在整个临床免疫检测过程中检验技术人员的综合素质与业务能力会对整个免疫检验的质量和结果产生重大的影响。因此，就要求临床免疫检验的工作人员要每天按时对相关检测设备进行消毒、搞好实验室的卫生；做好相关实验仪器的定期检查工作：如冰箱、恒温箱、水浴箱、酶标仪、荧光显微镜等，做好对整个实验仪器的记录使用情况，并如实填写实验报告，按规定进行免疫检验的质控工作，并分析情况做好记录，签字等工作。
4 临床免疫学检验与生物技术
以现代新型科学技术为依托的临床医学免疫检验技术的广泛应用，对现代免疫学研究的发展起了非常大的推动作用飞，其结果又在更深的层次以及更为广范的领域内促进了现代高新生物医疗技术产业的发展，能够使诸如细胞工程技术以及基因工程技术为代表的现代高科技技术得到更广泛应用。近年来伴随着疫苗、基因工程抗体治疗以及重组细胞因子研制为主的生物工程制品产业有了蓬勃的发展，极大地推动了现代免疫学防治的开展，对许多传染性疾病的传播起到了强有力的遏制作用，从而为挽救更多的生命做出了巨大的贡献。
5 小结
因此，对于整个临床免疫检验的过程而言，对免疫检验做好全面的质量管理是确保整个临床免疫检验结果准确性的重要保证。由于在对免疫检验标本进行采集到对标本进行检验的这个过程需经历很繁琐且比较复杂的一系列环节，因此，就要求临床医师必须要熟悉患者的生理、病理情况，同时，也要求护理人员及检验人员对临床免疫检验的各种影响因素要有全面系统的了解和认识，每一个环节的操作须做到规范化，完全按照标准进行，以确保免疫检验的可靠性和准确性，并提高临床治疗效果。
参考文献
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英文名称：Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology
主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
主办单位：中国免疫学会；第四军医大学
出版周期：月刊
出版地址：陕西省西安市
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种：中文
开
本：大16开
国际刊号：1007-8738
国内刊号：61-1304/R
邮发代号：52-184
发行范围：国内外统一发行
创刊时间：1985
期刊收录：
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概述：当前，经过权威资料认证的免疫组化实验方法，已经对免疫组化的最基本问题做出了解答，并可以作为免疫组化技术中一种相对的标准。本文对免疫组化的操作步骤作出了一些具体的描述，提出了一些注意事项，并且对当前、今后的免疫组化自动化和标准化作出了评价和展望。
免疫组织化学在病理诊断中的作用已得到广泛的认同，具有特异性高、敏感性高、程序相对一致等特点，并已成为病理诊断中不可或缺的重要辅助技术。尽管免疫组化的理论比较简单，但方法与步骤却比较繁琐，在实际应用中还存在不少问题，直接或间接地影响了最终的病理诊断。要想达到可靠的实验结果，最重要的是将免疫组化技术的全部程序形成一种概念上的标准化。本文就免疫组化技术的标准化进行一些浅显地探讨。
1 标本的固定
为了使细胞和组织保持原有的形态结构，防止组织自溶和抗原性丢失，固定是关键。标本离体后要求在15分钟内用10%中性缓冲甲醛固定，在常温下时间为8-24小时，避免过度固定，固定时间过长，切片中容易产生甲醛色素颗粒，会影响结果观察以及抗原的破坏。固定组织的固定液为标本体积的5-10倍，脱钙液对抗原也有较强的破坏，所以浓度和脱钙时间不易太长。
2 防脱片的制备
目前通用的是Sigma多聚左旋赖氨酸（Poly-L-ly-sine）或硅化片，具有很理想的防脱片效果。
3 包埋与切片
用过高温度的石蜡包埋组织会破坏抗原，对于固定不太好的组织影响更大，包埋用的石蜡应选用低熔点的石蜡，切片的厚度在3-4微米，以利于观察，太厚的切片会影响染色结果和诊断。
4 烤片
切片在50-60℃的恒温箱里烤片2小时，至少1小时才不至于脱片，烤片时间过短易脱片，时间过长或温度过高会破坏抗原。
5 脱蜡
免疫组化的脱蜡应与常规HE脱蜡分离，以保证脱蜡彻底，脱蜡不彻底会影响组化染色结果，切片脱蜡后进入梯度乙醇脱水至水化。
6 抗原修复
6.1 抗原修复是组化的关键技术
免疫组化染色中最关键的步骤可以说是抗原修复了，组化染色结果的表达与抗原修复直接相关。因组织被甲醛固定后蛋白质发生交联，抗原决定簇封闭，只有恢复抗原的免疫原性才能完成免疫化学反应。抗原修复方法有多种，主要是酶消化法与加热修复两种方法，现在由于加热抗原修复方法的广泛应用，酶消化法在免疫组化中的应用已很少。免疫组化的加热抗原修复方法包含微波法、水煮法、高压法，现在比较公认的修复效果是高压法大于水煮法，水煮法大于微波法。
6.2 抗原修复液的选择
抗原修复液有多种，有柠檬酸盐缓冲液（PH6.0）、EDTA（PH8.0）、Tris（PH7-8）等，目前柠檬酸盐缓冲液（PH6.0）可作为首选的常规使用的抗原修复液，它适合于大多数种类抗体，染色背景清晰。一般抗原难以表达的可以选择EDTA和Tris缓冲液，这两种修复液对一部分抗原修复效果较强，但染色背景较深。
6.3 抗原修复实例
在全国，有多家实验室对ER、PR进行了反复实验，得出的结论是强力推荐使用高压抗原修复方法。
我们单位在最近的免疫组化测评赛中，对参赛的5个待测抗原进行抗原修复，取得了比较满意的结果。根据我们得出的经验，检测CD10、CD30这两项抗原，我们推荐使用高温水煮修复，修复液为tris-EDTA(PH9.0)，检测ER、PR、CK这三项抗原，推荐使用压力锅，修复液为柠檬酸盐缓冲液（PH6.0），各单位可根据实验室的具体条件和经验选用微波、水煮、高压修复以及抗原修复液。
6.4 高压抗原修复方法
组织切片经二甲苯脱蜡至水，浸泡于蒸馏水中待用，取一定量抗原修复液于压力锅中，修复液必须浸没整张切片，加热沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温染色架上，放入已沸腾的修复液中，盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷气（整个时间约需4-5分钟），开始计时1-2分钟后，压力锅离开热源，室温冷却15分钟，取下气阀，打开锅盖，切片冷却至室温后，蒸馏水洗，PBS洗2min×3次。
7 生物素封闭
一般进行抗原修复处理的切片都需要进行内源性生物素封闭处理；
7.1 3%H2O2浸泡切片10min
在免疫组化染色中如果采用过氧化物酶检测系统，必须进行封闭处理，这样可以消除组织中的红细胞、粒细胞对染色结果的干扰。虽然3%的H2O2对抗原有轻微的损害，但封闭效果非常显著。
7.2 血清封闭
一般在加载一抗之前使用封闭血清（室温15-20分钟），可以减少非特异性显色。血清的种属一般与二抗的种属相同，一抗中若含正常血清则可以免去此步骤。
实验中通常用的冲洗缓冲液为PBS和TBS，加入Tween20可以加强冲洗效果，在组化染色中严格的冲洗可防止背景着色。
8 一抗孵育
加载一抗50-100ul，室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时，如4℃过夜后需在37℃复温45分钟，PBS洗3次各2分钟。
9． 加一滴（50ul-100ul）检测试剂（二抗），室温或37℃放置30分钟， PBS洗三次，每次2分钟。
10. DAB显色5-10分钟
11. 苏木素复染、脱水、透明、封片。
衬染的步骤十分简单，但衬染的好坏对染色质量的影响很大，不易太深或太浅。首选的是Harris苏木素衬染，它在水中洗涤后可以呈鲜亮的兰色，与DAB染色对照效果很好，使用简单方便。
对于即用型抗体，厂商已进行多种实验条件的检测，可以直接使用，而浓缩性抗体，可按照供应厂商提供的稀释度进行预实验，一般在厂家提供的滴度前后各加一个滴度做预实验，抗体的最佳稀释度为在无背景染色的情况下获得最强阳性信号。
通用的检测系统是生物素标记的辣根过氧化物酶为基础的检测方法，有SP、LSAB、ABC等方法，都是目前实验室广泛采用的检测方法，其方法简便易行且试剂稳定。SP三步法和Envision二步法高效经济，为国内免疫组化首选的检测系统。
显色系统通常采用的是辣根过氧化物酶系统，因此选择DAB（棕色）和AEC（红色）酶底物，常规组化显色首选的是DAB，它定位清晰，易于保存。
在免疫组化的质量控制中，最重要的是设立阳性和阴性对照，每批实验中最好有一张阳性对照和阴性对照，这样才能确保实验的可靠性，虽然很多医院病理科的工作量很大，但是不要怕麻烦，可以每月进行一次室间质控，以保证免疫组化染色结果的可靠性和准确性。
自动染色仪，它是一种各种试剂高度通用的仪器，可使用大多数免疫组化染色的抗体、检测系统和其他试剂，是当今最流行的开放式的自动染色仪。它利用电脑控制代替技术人员手工操作，大大地减少了手工操作出现的误差。自动染色仪能精确泵出每次滴加试剂的量，以及将每一步的染色时间精确到秒，空气压缩泵能均匀地吹掉切片上多余的液体，这一切彻底避免了免疫组化染色过程中人工操作的误差，染色仪将所有的染色步骤存储在电脑里，这些优点保证了染色结果的一致性，不同单位的实验室选择相同的试剂及染色过程就可以达到相同的染色结果。
近年来，随着免疫组化标准化的逐步实行，免疫组化自动染色仪将逐步进入病理科，技术人员将从烦琐的人工操作中解脱出来，会极大提高免疫组化的工作效率，同时也将免疫组化标准化推上了一个新的台阶。
学生初到陌生的学习环境，会有一个新环境适应的过程。作为带教老师，在学习上及生活上应该多关心及鼓励学生，让学生感受到来自老师的关怀，学生就更容易获得学习的乐趣。学生才能充分调动学习的积极性并在学习中获得愉快的情绪。
2临床案例与最新的免疫学理论有机地结合
现时临床医学免疫学教材中自身抗体内容与组织结构存在不合理之处，与现时的最新免疫学技术有些“脱节”，严重地影响了学生的学习效果和临床免疫学教学质量的提高。我们在教学过程中把解决的一些实例详解给学生，结合荧光显微镜结果，做到实践与理论一起讲解。同时，把临床意义与检查项目也作详细分析，例如：当检测系统性红斑狼疮（SLE）时，可以出现多个抗体，如抗双链DNA（dsDNA）抗体、抗核小体抗体及抗Sm抗体等，它们都可以出现在SLE患者血清中，但是前者的滴度高低与SLE的病情活动度呈正相关；而后者抗Sm抗体则与疾病的活动度无相关性，其出现只能作为一种记忆性抗体，可以较长时间出现在疾病的治疗前及治疗后。作为诊断SLE的金标准。
3参与检验质量控制，提高检验质量意识
室内质量控制对于检验医学来说十分重要，是由实验室技术人员利用统计学去评价实验室的可靠程度，是保证实验室所做结果的可靠性，检验报告是否可以发出的主要依靠。在每天日常的工作中，要培养学生做每一个项目都要有室内质量控制的意识，具体如下：首先科学设定靶值，在设定时，各实验室必需对每一个测定项目要自行确定靶值；不能说试剂盒给出定值就算了，设定时先连续测定同一批质量控制品20d，每天测定一次计算出的平均值作为暂定靶值。而常用靶值的设立是要依据前面20个及后面3~5个月的累计平均值作为常用靶值。其次还要指导学生如何处理在日常工作中可能出现的失控情况及原因分析，这一点对于提高学生的检验质量意识，立足培养下一代检验人才的成长十分有必要。
4原始记录、标本的保存及预防职业暴露
在带教过程中，要培养学生学会把当天的实验原始记录及已经检测的标本保存好，以备临床及患者对结果有异议时查看原始记录，必要时把标本调出来再重做实验。根据我科ISO15189医学实验室认可标准，已经检测的标本要保存1周；在工作过程中还得要教育学生做好预防职业暴露意识，如果发生职业暴露，通常应该遵循以下原则：及时处理、报告原则、保密原则及知情同意原则。
5培养学生危急值及时处理的意识
关键词:医学免疫学;教学改革;临床执业医师考试
执业医师资格考试是我国现阶段医师资格的准入考试，也是衡量医学院校教学质量的重要标准。自2001年执业医师资格考试实行全国统考以来，我国医学院校临床执业医师资格考试通过率始终低于70%［1］，反映出我国高等医学院校临床医学教学标准与医师资格准入门槛存在较大差距。研究表明，我国医学院校执业医师资格考试成绩与学生在校相关科目考试成绩呈正相关［2］，其中基础医学综合是执业医师资格考试的重要组成部分。我校临床医学专业执业医师考试通过率始终低于全国平均水平，明显落后于兄弟院校［3］，必须给予足够的重视，采取必要的措施扭转。医学免疫学作为国家临床执业医师资格考试中基础医学综合科目之一，是以免疫系统及其作用机制为主要研究对象，是生命科学和医学领域中一门重要的基础性、前沿性和支柱性学科，与临床医学、预防医学以及生命科学等多学科广泛交叉渗透。医学免疫学的理论与实践为临床相关疾病发病机制的探索以及免疫相关疾病的诊断和防治奠定基础。但医学免疫学理论具有很强的系统性和逻辑性，对于初学者而言内容较为抽象，如何使学生理解医学免疫学基本理论和实验方法，学好这门课程，是需要授课教师深入思考和解决的问题［4］。基于医学免疫学在生物医学领域中的重要性及其学科本身迅猛发展的现状，根据我校2018年临床医学专业人才培养方案，提出以临床执业医师考试为导向的医学免疫学教学内容改革，为我校临床医学专业本科生有针对性地重新修订教学大纲，优化教学内容，加强免疫学临床应用相关知识点的讲授，使学生在系统掌握医学免疫学的基本理论、基本知识与基本技能基础上，将所学知识整合和运用到分析免疫性疾病的免疫学特征和发病机制，培养学生分析解决临床实际问题的能力，以促进教学质量的提高。
1优化理论教学内容
根据我校2018年临床医学专业人才培养方案，修订医学免疫学教学大纲，将理论教学内容进行优化重组，在理论教学42学时不变的情况下，适当增加与临床结合紧密的教学内容，体现免疫学理论的系统性，增加感染免疫和黏膜免疫授课内容。
1．1基础免疫部分
以免疫应答为核心开展教学。从参与免疫应答的组成成分入手，包括免疫器官和组织、抗原、免疫分子(抗体、补体、细胞因子、主要组织相容性抗原)、免疫细胞(B淋巴细胞、T淋巴细胞、固有免疫细胞);围绕免疫应答(细胞免疫、体液免疫、固有免疫、黏膜免疫、免疫耐受)系统介绍免疫应答的各参与成分及免疫应答的发生过程。过去限于对黏膜免疫的认识不足，旧版本教材将黏膜免疫放在免疫器官和组织中简要介绍，直到2018年人民卫生出版社出版的《医学免疫学》(第7版)才将黏膜免疫独立成章。人体近50%的淋巴组织分布于黏膜系统，黏膜免疫系统构成了人体重要的防御屏障。鉴于黏膜免疫在机体免疫应答中的重要性，临床执业医师资格考试大纲中对其有8个知识点要求。我们根据教学实际情况，修订教学大纲，增加黏膜免疫，安排1学时在固有免疫应答后讲解，从而使学生对免疫应答有系统性认识。此外，在理论教学内容中去除临床执业医师资格考试不要求的抽象难懂内容，如抗体的多样性和免疫原性、T细胞和B细胞活化的信号转导途径等内容，便于学生系统学习理解免疫应答的发生过程。
1．2临床免疫部分
免疫系统的组成和功能异常可导致超敏反应、自身免疫病、免疫缺陷病、感染性疾病、肿瘤等免疫性疾病的发生。在临床免疫部分主要阐述免疫性疾病的发病机制及临床常见疾病。免疫学是在人类与传染病斗争的基础上发展起来的一门独立学科，免疫学发展的初期主要是抗感染免疫。过去，抗感染免疫分散至医学微生物学教材中，但限于教学学时、教学难度和交叉学科问题，免疫学教学内容不做授课安排，直到2018年人民卫生出版社出版的《医学免疫学》(第7版)才将感染免疫独立成章。感染性疾病是机体免疫防御功能低下或缺失导致的免疫性疾病，与免疫缺陷病的发生有相似之处。临床执业医师资格考试大纲中对其有5个知识点要求。我们根据教学实际情况，修订教学大纲，增加感染免疫，安排1学时在免疫缺陷病后讲解，从而使学生对免疫应答异常引起的免疫性疾病有整体认识。此外，在临床免疫教学内容中，针对各种免疫性疾病适当增加临床相关知识的讲授，结合临床典型案例，使学生对临床常见免疫性疾病的发生机制有深入认识。
2整合实验教学内容
在重新修订医学免疫学教学大纲理论教学内容基础上，保持实验教学12学时不变，对实验教学内容进行整合，精简验证性实验，增设综合设计性实验，鼓励学生开展创新性实验，使实验内容整体化，全部安排学生实验操作，提高学生动手能力的培养，而且精选出少数经典的、有代表性的和有临床价值的实验开展，可极大激发学生的学习兴趣［5，6］。整合前和整合后实验内容对比如下(见表1)。
2．1凝集反应实验
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两种类型。本实验包括利用直接凝集反应原理进行ABO和Rh血型鉴定判断血型，利用间接凝集反应原理进行类风湿因子检测诊断类风湿性关节炎，其中类风湿因子检测为新增实验。该实验内容均为凝集反应，有利于学生系统掌握凝集反应原理，去除原有实验内容中较为零乱单一的示教部分，如巨噬细胞吞噬试验、中性粒细胞吞噬试验、单向琼脂扩散试验、双向琼脂扩散试验。
2．2免疫标记技术实验
包括利用酶免疫技术建立酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒抗原/抗体诊断乙型肝炎，利用胶体金标记技术检测人尿液中绒毛膜促性腺激素诊断早孕，其中胶体金检测为新增实验。两项实验内容均为免疫标记技术，是临床常用的检测技术，使学生深刻认识到免疫标记技术在临床疾病诊断中的重要地位，有利于学生对授课内容的理解。去除原有实验内容中较为枯燥的示教部分，如E花环试验、淋巴细胞增殖试验。
