摘要：目的 建立优化的染色质免疫沉淀技术（ChIP）,分析乳腺癌细胞MDA-MB-231中DNA甲基转移酶3b（Dnmt3b）和组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）与SLC22A18基因启动子区的结合情况. 方法 建立并优化ChIP实验技术,运用ChIP技术检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-dc）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A（TSA）分别单独和联合作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-231后,用Dnmt3b和HDAC1特异性抗体沉淀DNA,聚合酶链式反应（PCR）检测SLC22A18基因5＇端特异性序列,免疫印迹法（Western blotting）检测Dnmt3b和HDAC1蛋白的表达情况. 结果 获得了优化的ChIP实验条件,Dnmt3b和HDAC1抗体沉淀的染色质片段中扩增出SLC22A18基因5＇端特异性序列.5-aza-dc、TSA单独用药可抑制DNMT3b、HDAC1与SLC22A18启动子区特异序列的结合,5-aza-dc和TSA联合作用可以明显抑制DNMT3b、HDAC1与SLC22A18启动子的结合 Western blotting结果表明,5-aza-dc、TSA单独及联合用药不影响DNMT3b和HDAC1蛋白的表达. 结论 DNMT3b和HDAC1在MDA-MB-231细胞内结合于SLC22A18基因启动子的特异区域,参与该基因的表达调控.

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