摘要：目的利用大肠杆菌原核表达系统优化表达纯化肠道病毒71型（EV71）VP3结构蛋白,为后续单克隆抗体制备及检测试剂盒研发提供前期基础。方法采用PCR方法扩增EV71病毒VP3基因,将其插入表达载体pET28a（＋）,构建pET28a-VP3重组质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株,分别在25℃、37℃下经IPTG诱导表达,重组表达的蛋白产物经凝胶电泳初步分析,比较不同温度诱导表达的蛋白产物。结果成功构建pET28a-VP3重组质粒,不同温度下诱导表达的蛋白产物在30.5 k Da左右位置均出现目的条带;37℃下诱导表达的蛋白超声破碎并离心后,目的蛋白基本位于沉淀中,而25℃诱导表达的蛋白产物有少量目的蛋白溶解于上清液中。结论在25℃或37℃下均能利用大肠杆菌原核表达系统有效表达EV71病毒VP3蛋白;37℃诱导时蛋白可融性表达低,目的蛋白获取效率较高。

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