摘要：目的分析酵母Candida Cloacae中长链脂肪酸醇氧化酶的酶活性结构域.方法利用RT-PCR技术,从酵母Candida cloacae细胞中克隆长链脂肪酸醇氧化酶的5个不同长度的cDN段.扩增这些片段的上游引物5'端引入了NheI限制性内切酶位点和起始密码ATG,下游引物5'端引入了NheI限制性内切酶位点.扩增产物经NheI消化后,被克隆进T7启动子控制下的表达质粒pET-17b中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株.结果转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达出5个不同长度的长链脂肪酸醇氧化酶的羧基端肽段,其氨基酸残基数分别为535AA(50KD)、473AA(43KD)、411AA(38KD)、306AA(26KD)和216AA(18KD).与完整的长链脂肪酸醇氧化酶(697AA)相比较,相当于它们分别从氨基端被切除162、224、288、391和481个氨基酸,其酶活性分别下降了18.8%、20.6%、88.6%、91.4%和99.7%.结论结果表明随着长链脂肪酸醇氧化酶的氨基端被切除的氨基酸数增加,其酶活性下降,尤其是切除224-288氨基酸序时,酶活性下降更明显,推测此肽段对长链脂肪酸醇氧化酶酶活性起重要作用.

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