摘要：目的探索从人外周血中分选及扩增高纯度NK细胞的方法，并初步了解扩增后的NK细胞功能的变化。方法采用免疫磁珠分选系统（miniMACS）阴性分选法，从外周血单个核细胞（PBMNC）中获得纯化的NK细胞，在干细胞培养基条件下，通过IL-2、IL-12和IL-15等细胞因子的不同组合，分别培养15d，每3d半量换液并补充细胞因子；检测分选及扩增前后NK细胞CD3CD56＋细胞含量、扩增倍数及扩增前后各组NK细胞穿孔素、颗粒酶BmRNA的表达水平及IFN—γ的分泌水平。结果经miniMACS阴性免疫磁珠分选后CD3-CD56＋细胞含量由分选前的（11．2±5．2）％提高到（94．2±3．5）％。培养15d后除对照组CD3-CD56＋细胞纯度略下降外，其余组与扩增前无明显差异（P〉0．05）。在IL-2、IL-2＋IL-12、IL-2＋IL-15、IL-2＋IL-15＋IL-12培养体系中，NK细胞扩增倍数分别为15．4±1．1，19．9±3．9，50．5±4．3和52．4±6．7，均显著高于对照组（6．1±1．0）（P〈0．01），但IL-2＋IL-15与IL-2＋IL-15＋IL-12组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。各组培养的NK细胞穿孔素、颗粒酶B基因的表达量均较扩增前明显增加（P〈0．01），IL-2＋IL-15组、IL-2＋IL-12＋IL—15组两种基因的表达量均显著高于其他组（P〈0．01），但两组问比较差异无统计学意义（P〉0．05）；各细胞因子组培养液中IFN-1分泌水平均显著高于未加细胞因子的空白对照组（P〈0．01），IFN-γ分泌水平IL-2＋IL-12＋IL-15组〉IL-2＋IL-12组〉IL-2＋IL-15组〉IL-2组（P〈0．01）。结论经miniMACS免疫磁珠阴性分选法获得少量NK细胞后，应用IL-2＋IL-15细胞因子联合培养是获得纯度高、细胞毒活性强、扩增效率高的NK细胞的简单有效方法。

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