首页 期刊 中华实验外科 人瘦素蛋白在大肠杆菌中的融合表达和纯化 【正文】

人瘦素蛋白在大肠杆菌中的融合表达和纯化

作者:李文娟; 陈伟; 朱任之; 付小兵 解放军总医院304临床部全军创伤修复重点实验室; 北京100037; 兰州大学基础医学院病理教研室
leptin基因   原核表达载体   克隆  

摘要:目的构建人瘦素因子(Leptin)的原核表达质粒pGEX-4T-3-LEP,并诱导该基因在原核细胞中大量表达。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)和DNA重组技术,从人皮肤成纤维细胞内将编码人Leptin的cDNA序列克隆至原核表达载体pGEX-4T-3上,选取阳性克隆扩增后,提取DNA进行酶切鉴定和测序。同时应用SDS-PAGE和蛋白质印迹方法对其表达产物进行特异性鉴定。结果克隆出的Leptin基因的cDNA由469bp组成,包括翻译起始密码子、编码序列和终止密码子等部分,含有Letinp基因的cDNA的表达质粒pGEX-4T-3在DH5a细菌体内能够表达,并且随着诱导时间的延长,Leptin基因的表达量增加,重组Leptin蛋白主要存在于包涵体中。结论Leptin基因可以在原核细胞中获得表达,为深入研究该蛋白在创伤愈合中的具体作用奠定了基础。

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