摘要：目的 探究调控人羊膜上皮细胞水通道蛋白8(AQP8)表达的信号转导通路 方法 以腺苷酸环化酶激动剂Forskolin 处理体外培养的人羊膜上皮细胞株WISH 细胞,将WISH 细胞随机分为不同浓度Forskolin 作用24 h 组和单一浓度Forskolin 作用不同时间组.前者培养基中分别加入Forskolin 0(对照组)、5、10、20、40、100、200 μmol/L,培养24 h;后者培养基中加入Forskolin 100 μmol/L 后分别培养4、8、16、24、48 h.采用蛋白质印迹技术检测各组细胞AQP8 蛋白表达水平;RT-PCR 技术检测Forskolin 处理不同时间组细胞AQP8 mRNA 表达水平;免疫荧光细胞化学方法检测Forskolin 100 μmol/L 作用24 h 组细胞AQP8 蛋白的分布.结果 对照组WISH 细胞AQP8 蛋白表达水平为0.027± 0.003,AQP8 mRNA 表达水平为0.026 ± 0.003.不同浓度Forskolin 处理组中,除了5 μmol/L 组外,其余各组AQP8 蛋白表达水平均高于对照组(P ＜ 0.05),高峰值出现在100 μmol/L 组(0.157 ± 0.006).Forskolin 处理不同时间的各组WISH 细胞,其AQP8 mRNA 和蛋白的表达水平均高于对照组(P ＜ 0.05),AQP8 mRNA 表达水平在16 h组达峰值(0.087 ± 0.007),AQP8 蛋白表达水平在24 h 组达峰值(0.158 ± 0.007).免疫荧光细胞化学染色显示,Forskolin 100 μmol/L 作用24 h 组细胞膜上的黄绿色免疫荧光信号较对照组明显增强.结论 Forskolin 可上调WISH 细胞AQP8 mRNA 及蛋白表达水平,使细胞膜上AQP8 蛋白的分布增加,提示细胞内cAMP-蛋白激酶A 信号转导途径的激活在人羊膜上皮细胞AQP8 表达的调控中发挥重要作用.

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