首页 期刊 中国药房 广西产拳卷地钱DNA的SCoT-PCR引物筛选及反应体系优化 【正文】

广西产拳卷地钱DNA的SCoT-PCR引物筛选及反应体系优化

作者:谢凤凤; 李鹏; 黎理; 朱华; 尚小红; 李平凤 广西中医药大学科学实验中心; 南宁530200; 广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室; 南宁530007
拳卷地钱   scot   pcr   引物筛选   体系优化  

摘要:目的通过筛选引物并优化反应条件,建立以目标起始密码子多态性(SCoT)技术进行标记的广西产拳卷地钱DNA的聚合酶链式反应(PCR)体系.方法:采用改进的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取广西产拳卷地钱药材样品DNA,以凝胶电泳法与紫外分光光度法考察样品DNA的纯度和浓度;以样品DNA为模板,对36 条SCoT引物进行PCR扩增反应,并对产物进行电泳、染色、成像以筛选合适引物;以DNA浓度、Mg^2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度等5 个主要因素进行5因素4水平的正交试验,对SCoT-PCR反应体系条件进行优化.结果:所提取的样品DNA条带整齐,无RNA污染、无降解、无弥散荧光,加样孔清晰;260、280 nm紫外波长处吸光度比值在1.8-2.0范围内,样品DNA纯度和浓度均适合后续试验;36条引物PCR结果显示,4号引物所得产物条带整齐、无弥散荧光且亮度最高,故以其为引物进行PCR反应;最佳SCoT-PCR 反应体系为30.00 μg/mL DNA、2.00mmol/L Mg2+、0.20 mmol/L dNTP、0.40 μmol/L引物、0.50 U/mL Taq DNA聚合酶(总反应体积20 μL).结论:筛选得到合适的样品DNA的SCoT-PCR引物并优化了反应体系,可为广西产拳卷地钱的品种鉴定、遗传多样性评价及亲缘关系分析提供技术基础.

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