摘要：为构建小鼠Ghrelin基因的真核表达质粒,并研究Ghrelin对3T3-L1细胞增殖的影响,以小鼠肠cDNA为模板,通过PCR扩增Ghrelin基因,插入到pMD18-T克隆载体中。对经鉴定的重组质粒pMD-Ghrelin进行双酶切,将目的基因连接到经同样双酶切的真核表达载体pcDNA3.1（＋）上。重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后,用Lipofectamine 3000转染试剂将重组表达质粒转染到3T3-L1细胞中,采用qRT-PCR和Real-time PCR检测Ghrelin基因在3T3-L1细胞中的表达。采用CCK-8法检测细胞的生长活力;流式细胞术检测Ghrelin基因对细胞周期和凋亡的影响;采用Real-time PCR检测部分周期相关基因的mRNA表达水平。结果显示,成功构建了小鼠Ghrelin基因的真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-Ghrelin,并能在3T3-L1细胞中得到很好地表达,其表达倍数是空质粒组的5倍（P〈0.01）;转染后第48、72和96小时,Ghrelin转染组3T3-L1细胞的生长活力明显高于空载体组（P〈0.05或〈0.01）;转染后第24小时,Ghrelin转染组S期细胞数量明显高于空载体组（P〈0.05）;Ghrelin过表达对3T3-L1细胞的凋亡无明显影响（P〉0.05）。qRT-PCR结果显示,Ghrelin转染组细胞的c-myc（P〈0.05）、E2F1、CDK2（P〈0.05）等mRNA的表达量也明显高于空载体组,P53表达低于空载体组,差异显著（P〈0.05）。以上结果表明,Ghrelin过表达能显著促进3T3-L1细胞的增殖,但不影响凋亡。

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