摘要：目的本文旨在构建STAT6-ORF表达载体,包装成慢病毒颗粒。方法应用嵌套PCR法从生长状态良好的293FT细胞的c DNA中扩增STAT6的完整读码框片段(2544 bp),根据需要在引物的5’端分别引入Cla I和Mlu I酶切位点,将PCR产物克隆到p MD20T载体上,得到p MD20T-STAT6-ORF克隆;测序验证后,用Cla I和Mlu I双酶切p MD20T-STAT6克隆,回收酶切产物得到的STAT6-ORF片段,通过T4 DNA连接酶连接到p LVTHm表达载体上,经双酶切和测序验证正确,获得p LVTHm-STAT6-ORF表达载体。结果构建带有增强绿色荧光蛋白EGFP(enhanced green fluorescence protein)标记的STAT6-ORF表达载体,包装成慢病毒颗粒,结果表明成功构建及包装带STAT6-ORF目的片段的慢病毒表达载体。结论 p LVTHm-STAT6过表达载体构建成功,可以进行慢病毒包装与鉴定。

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