首页 期刊 中国国境卫生检疫 伯氏疏螺旋体分型多重实时荧光定量PCR检测方法的建立 【正文】

伯氏疏螺旋体分型多重实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者:蔡婧 王建成 孙肖红 徐宝梁 王静 富英群 侯咏 杨宇 承德医学院 河北承德067000 中国检验检疫科学研究院 黑龙江出入境检验检疫局
伯氏疏螺旋体   多重荧光定量pcr   检测  

摘要:目的建立一种检测伯氏疏螺旋体的分型多重实时荧光定量PCR方法,可对3种致病基因型伽氏疏螺旋体B.garinii、阿氏疏螺旋体B.afzelii、狭义伯氏疏螺旋体B.burgdorferi sensu stricto检出并分型。方法针对3种基因型菌株的外膜蛋白osp C基因,在保守序列设计通用引物并分别设计型特异Taqman探针,3条探针分别标记FAM、Texas Red和CY5荧光报告基团,建立和优化多重实时荧光定量PCR反应体系,检测其敏感性和特异性。结果建立的多重荧光定量PCR的最低检测值为B.garinii 40copies/μl、B.afzelii 5.17copies/μl和B.burgdorferi sensu stricto 37.8copies/μl,通过检测立克次体、土拉弗朗西斯菌无交叉反应,检测100只游离蜱与常规PCR结合测序结果分型一致,说明本方法有较好的灵敏性和特异性。结论该方法能快速检测伯氏疏螺旋体并同时分型,为莱姆病的诊断提供新方法。

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