摘要：旨在研究玻璃化冷冻对猪孤雌激活囊胚中细胞凋亡的影响。通过体外培养观察冷冻-解冻后囊胚腔的恢复情况,JC-1检测线粒体膜电位变化、TUNEL法检测胚胎中细胞凋亡水平,免疫荧光分析多种Caspase活性,以及qRT-PCR检测凋亡相关功能基因的mRNA表达水平。结果表明,冷冻-解冻后囊胚的囊胚腔恢复率（31.03%）和囊胚细胞数（31.81）与新鲜囊胚（100.00%和38.17）相比均显著下降（P〈0.05）。冷冻后囊胚的线粒体膜电位（0.46）与新鲜囊胚（1.02）相比显著下降（P〈0.05）。TUNEL凋亡染色后,冷冻囊胚中凋亡阳性细胞的比例（10.13%）显著高于新鲜囊胚（5.92%,P〈0.05）。Caspase原位荧光染色结果表明,Pan-caspase、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3冷冻-解冻囊胚的荧光强度值（20.65、20.60、17.58和19.88）均显著高于新鲜囊胚（7.41、6.46、5.47和6.32,P〈0.05）。经qRT-PCR检测,冷冻组中Caspase-8、Caspase-9、TNF-α基因的mRNA表达水平均显著高于新鲜组（P〈0.05）,BCL-2、SOD-1的mRNA表达水平则显著低于新鲜组（P〈0.05）。综上表明,玻璃化冷冻可造成猪孤雌激活囊胚线粒体功能下降,并在死亡受体和线粒体途径上共同介导囊胚内细胞凋亡的发生。

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