首页 期刊 现代生物医学进展 蔗糖磷酸化酶全细胞催化AA-2G的条件优化 【正文】

蔗糖磷酸化酶全细胞催化AA-2G的条件优化

作者:余磊; 李骥璇; 王忆茗; 郑桂兰; 王洪钟 清华大学生命科学学院; 北京100084; 复旦大学附属中山医院骨科; 上海200032
蔗糖磷酸化酶   全细胞催化  

摘要:目的:使用表达蔗糖磷酸化酶(EC2.4.1.7,Sucrose phosphorylase,SPase)的大肠杆菌重组工程菌E.coli BL21/pET-spase,作为全细胞催化剂,合成2-O-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸(Ascorbic acid 2-glucoside,AA-2G)。通过反应条件的优化研究,提高AA-2G的收率。方法:分别考察菌体量、缓冲液pH、蔗糖浓度、维生素c浓度、反应时间和温度对AA-2G合成反应的影响,再组合上述最佳条件进行反应。AA-2G的产量使用高效液相色谱法进行定量。结果:最佳反应条件为:菌体量15mg/mL,缓冲液pH4.5,蔗糖浓度100g/L,维生素c浓度175g/L,反应时间20h,温度37℃。在此条件下,AA-2G产量达到了35.7g/L。结论:以蔗糖为底物,使用SPase合成AA-2G的研究报道较少。本研究通过优化此方法的反应条件,让AA-2G的产量得到了大幅提高。同时本研究中成功地采用了大肠杆菌工程菌作为全细胞催化剂,这比传统的使用粗酶液的方法更省时省力,有良好的应用潜力。

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