摘要：本研究采用黑曲霉Bdel4菌株为宿主菌,敲除glaA,aamA,An05g02100和An12g06930四个主要的胞外分泌蛋白,为核酸酶P1的表达和分泌提供通路。通过PCR扩增得到黑曲霉Bdel4的rDNA序列,构建了以rDNA序列为整合位点的重组质粒pRpT-nucP1-18S和pRpT-2A-nucP1-18S,将构建的重组质粒pRpT-nucP1-18S和pRpT-2A-nucP1-18S转入黑曲霉Bdel4。通过半荧光定量PCR进行转化子初筛,之后测定核酸酶P1的酶活复筛,选出一株高活性菌株用于工业生产。采用SYBR Green实时荧光定量PCR法对含外源目的基因nucP1的总基因组样本重复检测,取平均值作为目的基因拷贝数,探究其与酶活表达水平之间的联系。结果显示含9个nuc P1基因拷贝数的菌株的酶活水平达到88.5U/mL,较核酸酶P1单拷贝菌株增加了3.86倍,较之前研究中异源表达核酸酶产量提高1.20倍,再增加nucP1的拷贝数时,酶活水平随着拷贝数的增加而降低。

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