摘要：目的探讨慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记大鼠脂肪干细胞(ADSCs)最适感染复数,检测EGFP-ADSCs干细胞特性及体内活性。方法提取培养大鼠脂肪干细胞,流式细胞仪表型鉴定及成骨、成脂、成软骨多向诱导分化。采用携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体(Lentivirus-EGFP)以不同的感染复数MOI=0、1、5、10、25、50转染ADSCs,流式细胞仪测转染率,筛选合适MOI。CCK8测转染后ADSCs的增殖能力。EGFP-ADSCs成骨、成脂、成软骨诱导后分别行碱性磷酸酶、油红O及阿尔新蓝染色检测。将标记后的细胞注射到大鼠皮下,术后1,2,4w取材行冰冻切片荧光观察及免疫组织化学染色,观察EGFP-ADSCs在体内的表达情况。结果 CD90阳性表达,CD34阴性表达,脂肪干细胞向成骨、成脂、成软骨分化。MOI=0、1、5、10、25、50的转染率分别是0.12%、3.62%、42.4%、66.6%、90.4%、98.0%。CCK8法测转染组(MOI=25)与未转染组(MOI=0)细胞增殖能力无明显差别。EGFP-ADSCs经诱导后仍向成骨、成脂、成软骨分化。1w,2w,4w见细胞于移植部位。结论慢病毒介导的EGFP基因标记大鼠脂肪干细胞最适感染复数为25,且不影响干细胞活性及多向分化潜能,可以成为标记脂肪干细胞的理想方法。

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