摘要：利用黑曲霉自身强启动子(葡萄糖淀粉酶启动子,PglaA)实现了酸性果胶裂解酶PelD在黑曲霉中的过量表达,重组酸性果胶裂解酶经镍柱亲和层析纯化后进行Western blot鉴定及酶学性质研究。重组酸性果胶裂解酶在摇瓶发酵条件下最高酶活力达到8 822.6 U/mL;经一步纯化后,该重组酶的比活力为8 522.7 U/mg,回收率为79.4%;该重组酶的最适反应pH值为5.0,在pH 3.0~6.5范围内40℃保温2 h仍能保持50%以上的相对酶活力,在酸性pH值下稳定性良好;最适反应温度为50℃,该重组酶在30~50℃的范围内非常稳定;在1 mmol/L浓度下,Ca2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Ni2+、Mn2+、Ba2+对该重组酶具有激活作用,其中Zn2+、Ni2+、Ba2+激活作用较为显著,而十二烷基硫酸钠表现为抑制作用;底物特异性分析表明该酶能够特异性地降解高度甲酯化果胶,其对柑橘果胶(酯化度≥85%)酶活力高达31 248.0 U/mL;此外,重组酶对橙汁、苹果汁和葡萄汁具有良好的澄清效果,其中橙汁的透光度提高了16.9倍,苹果汁的透光度提高了10.5倍,葡萄汁的透光度提高了4.7倍。

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