摘要：目的： 体外研究shRNA（short hairpin RNA）沉默基因TRAF6的表达对RAW264.7细胞增殖的影响, 初步探讨TRAF6-shRNA对LPS/TLR4胞内信号转导的影响. 方法： 构建靶向抑制小鼠TRAF6的shRNA的真核表达载体, 转染RAW264.7细胞后培养48 h, 予以终浓度为100 ng/mL的LPS刺激, 0、4、8 h和16 h后收集细胞上清, 同时设空白对照及地塞米松阳性对照组, ELISA法测定上清液中TNF-α、IL-1β、TGF-β1, Real-time PCR方法检测TRAF6、IL-6、COX-2 mRNA, Western blot检测细胞核内NF-κB p65. 结果： 转染TRAF6-shRNA 48 h后, TRAF6 mRNA及蛋白表达明显受到抑制, 其抑制率分别为79.17%、68.74%. MTT法检测结果显示, 重组质粒转染72 h内对细胞增殖无明显的抑制. LPS刺激后, TNF-α、IL-1β、TGF-β1表达量都有明显变化（P〈0.01）, 其中TNF-α、IL-1β在8 h达高峰, TGF-β1在16 h达高峰, TRAF6 基因沉默后, 以上细胞因子增长率明都显下降（P〈0.01）. 实验结果显示, TRAF6基因沉默明显能下调IL-6、COX-2 mRNA表达, 并能抑制LPS激活的NF-κB核转位. 结论： 重组质粒TRAF6-shRNA能有效降低RAW264.7细胞中基因TRAF6 mRNA及蛋白的表达, 并对内毒素炎症反应具有明显的抑制效应.

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