首页 期刊 世界华人消化 结肠癌羟基喜树碱耐药细胞SW1116/HCPT酵母双杂交cDNA文库的构建和鉴定 【正文】

结肠癌羟基喜树碱耐药细胞SW1116/HCPT酵母双杂交cDNA文库的构建和鉴定

作者:靳西凤; 冉志华; 陈翔; 萧树东 上海交通大学医学院附属仁济医院、上海市消化疾病研究所; 上海市200001
酵母细胞   smart技术   酵母双杂交cdna文库   同源重组  

摘要:目的:构建羟基喜树碱耐药结肠癌细胞株SW1116/HCPT细胞的酵母双杂交cDNA文库. 方法:用TRIzol从SW1116/HCPT细胞提取总RNA,采用CLONTECH SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术和同源重组(homologous recombination)的方法构建SW1116/HCPT细胞的cDNA文库. 结果:提取的RNA的A26/A280为1.98,甲醛变性琼脂糖凝胶电泳示出28S rRNA、18S rRNA及5S rRNA3条特异性带,28S与18S带浓度及亮度比值约为2.文库ds cDNA smear较长分布在0.1-5kb,成长瀑布条带,而且在接近1kb的区域有密集的带子,为高丰度表达基因.依据生长菌落计数,共获得(1.2-1.9)×10^6个转化子,重组率达93.7%,文库插入片段大小为02.5kb. 结论:成功构建了SW1116/HCPT cDNA文库.

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