摘要:用SDS、CTAB和改良CTAB法分别提取大花蕙兰叶片基因组DNA,发现以改良CTAB法提取的DNA纯度高,产率也较高。以5’-GGTGCTCCGT-3’(BA440)为随机引物,并以大花蕙兰品种‘金杯’(Cymbidium hybridium CV.Hiroshima Golden Cup“Sunny Moon”)的DNA为模板,对RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)反应体系进行了优化研究,结果表明,25μl反心体系中,Mg^2+、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA和dNTP5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:2.0mmol/L、L0U、0.20μmol/L、25ng和0.20mmol/L。扩增程序优化为:94℃预变性4min;94℃变性0.5min,37℃退火1min,72℃延伸1min,40个循环;最后72℃延伸7min。
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