摘要：选择禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)基因组序列高保守区,按照多联PCR引物的设计要求,利用DNAsis计算机软件设计并合成了4对特异性扩增引物,扩增片段大小分别为470、320、200和140bp.以AIV、NDV、CSFV和FMDV的培养物提取RNA并反转录,进行RT-PCR特异性扩增.结果表明,各单项RT-PCR扩增产物与设计的4对引物之间的序列大小一致.在分别建立了各病毒单项RT-PCR及AIV与NDV、CSFV与FMDV二联RT-PCR的基础上,进一步优化各种多联PCR扩增条件,成功建立了上述4种病毒的四联RT-PCR技术.经特异性和灵敏度实验证明,本方法具有高度的特异性和灵敏性,其灵敏度为10 pg总RNA.在3 h内即可完成样品的检测.

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