首页 期刊 林业工程学报 南方红豆杉ISSR-PCR反应体系的建立与优化 【正文】

南方红豆杉ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作者:廖盼华; 汪庆; 李亚; 姚淦; 杨如同; 王淑安 江苏省中国科学院植物研究所; 南京中山植物园; 南京210014
南方红豆杉   issr   体系优化   正交设计  

摘要:以南方红豆杉DNA为模板,采用正交试验设计对影响南方红豆杉ISSR-PCR扩增的参数进行了优化。结果表明较佳的南方红豆杉ISSR-PCR的反应体系(20μL)为模板DNA 60 ng,10×PCR buffer 2.0μL,25 mmol/L的MgCl21.0μL,2.5 mmol/L的dNTPs 1.0μL,10μmol/L的引物1.0μL和反应酶0.2 U。适宜的扩增条件为94℃预变性4 min,41个PCR循环(94℃变性30 s,54.5℃退火45 s),72℃延伸80 s,72℃延伸5 min,4℃保存。

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