首页 期刊 江苏农业科学 家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定 【正文】

家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定

作者:陈萌萌; 范志宇; 胡波; 宋艳华; 魏后军; 仇汝龙; 朱伟峰; 徐为中; 王芳 江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心; 江苏南京210014
家兔   兔出血症病毒   启动子   荧光素酶   转录调控  

摘要:通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序确定全长为550bp;预测软件分析,与人源IFN-β基因启动子的转录上调区域(positive regulation domain,PRD)高度同源;随后将启动子全长和一系列转录元件克隆至pGL6-Basic荧光素酶表达载体中,成功构建重组体报告基因质粒后,瞬转RK-13细胞,利用试剂盒检测荧光素酶的相对活性。结果显示,克隆的IFN-β基因启动子区和AP-1、IRF3、NF-κB和IRF7等转录元件具有显著的活性,为研究兔出血症病毒对宿主IFN-β基因的转录调控机制提供了有效的工具。

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