首页 期刊 江苏农业科学 虎杖MYB转录因子PcMYB2基因的克隆与原核表达 【正文】

虎杖MYB转录因子PcMYB2基因的克隆与原核表达

作者:李晓筱; 徐俊雄; 刘婵; 王岩岩; 伍翔; 覃建兵; 柳忠玉 长江大学生命科学学院; 湖北荆州434025
虎杖   myb转录因子   pcmyb2   原核表达   苯丙烷代谢  

摘要:为了探究MYB(髓细胞组织增生病毒癌基因同源物)转录因子在虎杖苯丙烷代谢途径中的作用,以虎杖叶片为材料,通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得1个MYB转录因子,命名为PcMYB2,GenBank登录号为MG020557。序列分析表明,PcMYB2基因的cDNA序列全长为938bp,开放阅读框(ORF)为738bp,编码245个氨基酸,推测蛋白质分子质量为27.917ku。PcMYB2编码的氨基酸序列具有R2R3-MYB类转录因子的共同特征,其N端具有R2、R3这2个MYB结构域,并且R3结构域中包含1个能与bHLH转录因子相互作用的[D/E]Lx2[R/K]x3Lx6Lx3R基序。进化树分析表明,PcMYB2蛋白与苜蓿中参与原花青素调控的MtPAR聚为1组。将该基因的ORF片段连接到原核表达载体pET20b中,构建融合表达载体pET20b-PcMYB2,转化到大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)检测显示表达蛋白与预期大小一致,表明成功克隆PcMYB2基因的cDNA全长序列,构建的原核表达载体pET20b-PcMYB2可用于该基因的功能研究。

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