摘要:鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)是多数中草药植物、药用菌中三萜合成途径中的限速酶,能影响三萜含量的积累。构建了牛樟芝鲨烯环氧酶基因(se)原核表达载体,并进行其重组蛋白诱导表达条件优化。以牛樟芝cDNA为模板扩增se,纯化后将其克隆到pMD18-T载体上,筛选阳性克隆并将其连接到原核表达载体pET28a,构建重组质粒pET-28a-se经酶切验证后转化E.coil B121(DE3)感受态细胞进行诱导表达,利用k(34)正交试验优化目的蛋白诱导表达条件及纯化。结果表明,不同正交处理间的蛋白表达差异显著(P〈0.05),其诱导因素的主次为时间〉温度〉IPTG浓度,诱导时间对重组蛋白表达影响最显著(P〈0.05)。而IPTG浓度和温度对重组蛋白表达影响并不显著(P〉0.05),且当IPTG终浓度为0.2mmol/L,诱导时间为7h,诱导温度为26℃时,对SE重组蛋白的诱导效果最佳。
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