首页 期刊 江苏农业科学 牛樟芝se原核表达载体构建及重组蛋白的表达、纯化 【正文】

牛樟芝se原核表达载体构建及重组蛋白的表达、纯化

作者:李晶; 李芳娜; 林雄杰; 王锦锋; 林占熺 国家菌草工程技术研究中心; 福建福州350002; 福建省农业科学院果树研究所; 福建福州350003; 福建农林大学菌草研究所; 福建福州350002
牛樟芝   鲨烯环氧酶   原核表达   正交设计  

摘要:鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)是多数中草药植物、药用菌中三萜合成途径中的限速酶,能影响三萜含量的积累。构建了牛樟芝鲨烯环氧酶基因(se)原核表达载体,并进行其重组蛋白诱导表达条件优化。以牛樟芝cDNA为模板扩增se,纯化后将其克隆到pMD18-T载体上,筛选阳性克隆并将其连接到原核表达载体pET28a,构建重组质粒pET-28a-se经酶切验证后转化E.coil B121(DE3)感受态细胞进行诱导表达,利用k(34)正交试验优化目的蛋白诱导表达条件及纯化。结果表明,不同正交处理间的蛋白表达差异显著(P〈0.05),其诱导因素的主次为时间〉温度〉IPTG浓度,诱导时间对重组蛋白表达影响最显著(P〈0.05)。而IPTG浓度和温度对重组蛋白表达影响并不显著(P〉0.05),且当IPTG终浓度为0.2mmol/L,诱导时间为7h,诱导温度为26℃时,对SE重组蛋白的诱导效果最佳。

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