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使用TALENs技术构建丁酰胆碱酯酶敲除小鼠模型研究

作者:胡婷婷; 赵海山; 张昊; 谭文 华南理工大学生物科学与工程学院/生物医药前孵化器研究中心; 广州510006; 广东工业大学生物医药研究院; 广州510006
载体构建   小鼠   基因敲   除   纯合子  

摘要:为了使用转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术构建丁酰胆碱酯酶(BChE)敲除小鼠模型。试验设计多对TALENs组合,合成相应的载体,并通过3T3细胞系对这些载体的活性进行检测,选择出活性最高的组合进行体外转录获得TALENsmRNA,并注射入小鼠受精卵中,对子代小鼠进行基因测序并筛选,最终获得BChE基因敲除小鼠。结果表明:针对4个基因位点设计并构建了30对TALENs组合,选择最优3L3—3R1组合进行体外转录并注射入小鼠受精卵,获得4只携带突变的FD代嵌合体小鼠;通过杂交及筛选,最终获得4只携带移码突变的F1代小鼠,可用于交配繁殖。说明通过TALENs技术可以稳定可靠地制备BChE基因敲除小鼠,并用于后续BChE功能的研究。

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