×长城励家镇前邢村邢建光
×我叫邢建光，今年岁，是前邢村六组的一位农民，作为一名党员，不但自己率先致富，而且要带领大家共同致富，做一名新型养猪致富带头人不仅是我应尽的义务，也是我多年的愿望，这个愿望经过自己十四年的苦苦探索和不懈努力，今天终于实现了，十四年的养猪生涯，经历过顺境，也有过逆境，品尝到了成功的喜悦，也饱尝了创业的艰辛，十四年累计出栏肥猪多头，获得了可观的经济收入，仅年出栏头，获纯利万元，今年上半年出栏头，获纯利万元，预计下半年可出栏头，全年获纯利润可突破万元，有人说我养猪每斤毛猪比别人多卖元—元是不是养猪有什么秘诀呢？如果说我养猪有什么所谓秘诀的话，那么在这里我可以毫无保留地欣慰地告诉大家，那训是走自繁、自养、自防新型成功养猪致富之路。
×每家每户都想过好日子，都想早日富裕起来，都有一本难念的致富经，而我的养猪致富经得从年说起，年乡镇企业转制后，就回家务农我想只靠种大田高梁玉米，不干点别的是富不起来的，尤其是当时正年纪轻轻，总想干点事业的我更是不安于种大田，当时正是养猪热，看见周围许多人通过养猪富起来，心里就气得慌，于是，养猪致富的梦想在我心里就扎了根，何不大干一场子，干出个样子来，一来自己致富，二来也给群众做个样子，要是能这样，该有多好哇？于是，我东挪西借凑了万元资金，办起了家庭养猪场，一次购进了多头仔猪，可是出栏时由于当时生猪价格低，再加上猪的品质较差等诸多因素，不但没挣钱，而且还赔了不少钱，损失惨重，创业的艰辛与痛苦使我感到，干一番事业没有胆识和恒心是不行的，俗话说：“失败是成功之母”。不吃一堑，不长一智，我看到听到许多名人在成功的背后也不是一番风顺，也有过挫折和失败。此时，一心想致富的我不但没有灰心丧气，更加坚定了养猪信念，反而使我的头脑变得更加清醒起来。决心在哪里跌倒，就在哪里站起来，虽然损失的是资金，但却从失败中找到了经验和教训，我认真查找失败的原因，同时，多次到附近猪考察，认为要重新崛起，必须打破传统养猪观念，依靠科学、降低成本、创新方法，选育优良种猪，走自繁、自养、自防新型养猪致富之路，先后从北京、吉林、阜新购进长白、大白、皮特兰、阜新等地购进优良品种头，当年就有头种猪开始产仔虽然只产头，但到年底一算帐，就获利余元。有了收入，心里就有了些底，就和爱人商量，扩大规模，在原有个育肥圈的基础上，又建个母猪圈，同时购买许多科学养猪、种猪管理、防疫灭病的技术书籍，白天没工，就晚上钻研学习养猪技术，有时直到深夜，光学习书本还不行，还要结合实践，细心观察，为了把种猪养好，提高种猪的配种率，保胎率和成活率，每当种猪产仔时，就钻进产房里昼夜管护，遇到冬天严寒，还要加温，遇到猪得了病，开始求教兽医，后来学会了防疫，就自己来防，总之，在养猪过程中，不知受了多少苦，挨了多少累，也不知道有多少个不眠之夜在猪的产房里度过的。然而，辛勤的汗水没有白流，在多年的自繁、自养、自防养猪实践中，不仅在育肥方面，而且在配种、保胎、繁育仔猪等方面都积累了一定的经验。如：母猪要保持适当的膘情，不要过肥，肥了不准胎或产仔少，瘦了出死胎或易流产，在产仔前，为了保胎产仔前天用土霉素连喂天，产仔后口服链霉素，过一个小时后吃奶，同时，猪群养防结合起来，按时防疫注射，做好防疫灭病，定期消毒，讲究卫生，控制发病，由于自己在多年养猪实践中掌握一条龙的饲养管理和防疫灭病技术，产仔成活率不断提高，成本不断降低，效益不断提高，由年产窝，窝产—头，育成率。提高到年产窝，窝产—头，育成率达以上，目前，我养猪群全部实现了“三化”，即公猪纯种化、母猪良种化、仔猪杂交化，由于自繁、自养、仔猪均是二元、三元杂交商品猪，不仅生长快，肉质好，瘦肉率高，出栏比别的养猪户提前—天，而且外地客商争相购买，每公斤毛猪高于别人元左右，年出栏多头，获纯利万元，年又扩大了养猪规模，投资万元修建了个封闭式产仔室，投资万元又建了个育肥圈，投资万元引进长白、大白种公猪头，在年获利万元的基础上，年养猪又上一个新台阶，年底可出栏头，每头纯利在元以上，纯收入可突破万元。
写作作为语文学习中自主性最强的部分，应该在课堂教学中充分运用合作策略，为学生提供多种形式的合作平台，在合作学习中提高学生的语文能力和素养，提高写作课堂教学的实效性。
一、写作课堂中运用合作策略的背景及作用
（一）背景
课标指出，语文课程“应致力于学生语文素养的形成与发展”，使学生“逐步形成良好的个性和健全的人格，促进德、智、体、美的和谐发展”。
面对课标坚持知识能力与人文素养并重的客观形势，传统语文教学观点逐渐被一些新教学理念所替代。这些新的理念不仅注重学生的文化素养与能力，更侧重于培养和塑造学生健全、高尚的人格。在写作教学中运用合作策略正是体现这一新理念的重要措施。
（二）作用
传统作文教学只注重个体写作而练就的单一僵化的思维，使很多学生怕作文，作文毫无个性和新意。合作策略则运用现代教育理论的群体优化效应与有效的合作资源共享的原则，使每个参与者的思维在互相启发影响下进入最佳状态。首先，在素材积累方面，学生们的阅历、思维在合作中聚合碰撞，拓宽学生写作的生活空间，使学生的写作素材更为丰富新颖；其次，在构思立意方面，学生通过合作，碰撞出思想的火花，燃烧起情感的火焰，作文立意不仅有了深度，创新热情和创新思维都将得到全方位的强化。再次，在写作评价上，通过合作小组成员自改自评、学生之间互改互评、组与组之间相互交流等形式，更有助于学生形成自主的作文修改习惯和提高作文个性能力，从而完成创新佳作。
二、写作教学课堂中运用合作策略的课型例举
如何更有效地在有限的作文课堂中更有效地运用合作策略呢？笔者认为教无定法、学无定法，所有的教学理念与策略都不是一成不变的。下面，仅就本人在写作教学实践中运用合作策略，为学生提供合作平台所尝试的几种写作教学课堂类型稍做介绍。
（一）活动体验课型
这种课型最大的特点就是通过开展一些活动，如游戏、竞赛等，让学生亲自参与、亲身体验，然后依据活动进行写作，一方面可激发学生的写作兴趣，另一方面解决学生写作材料的缺乏。这种课型大致的程序可以是活动―讨论―撰文―交流―评价，在这课型中的六大环节中，五大环节需要学生合作完成。
如一位教师在上《写真我，抒个性》的作文指导课时，首先是让一组学生做评选班级形象大使的游戏，再叫同学们就此游戏谈谈自己的看法、感受，不但评选出了形象大使，还讨论出了某某同学入选的原因，接着就让学生根据这个游戏内容撰文，同学们写好后，小组内交流，成员朗读自己的作品，其他同学评判，从而推荐出好文章若干篇，在班上交流、互评。
这种课型的最大特点是学生在合作之趣中写作，玩中写、玩中学，玩得有趣，写得也会有趣。
（二）资源共享课型
这种课型是提前两到三天给学生作文题目或话题，要求学生课下去搜集材料，并列出思路提纲，作文课堂上与同学交流材料和提纲。众人拾材火焰高，这样可以使学生丰富写作素材，学习最佳构思。这种课型大致的环节是：搜集材料―列出提纲―课堂交流共享―重新立意构思―撰写成文。
如以“心愿”话题作文为例，课前两天布置学生去选择材料，寻找自己的五个最想实现的心愿，并通过思考筛选，取其中最有话可说的一个，列出提纲；课堂上交流时，学生把自己收集的材料提纲与同学交流，由小组内合作或全班同学依据话题来分析，剔除不适合话题的或不好的材料，选出最典型最富有创意的材料及思路。如我想有一件新衣服，我想吃麦当劳等平淡无新意的材料就在讨论中被否定，而我渴望世界和平、我想拥有一片自由的天空等新颖的题材就被保留下来；学生根据讨论交流意见，或修改、或挖掘材料与思路的新意，再一次构思立意，最后写成文章。
这种课型的最大特点在于学生在合作过程中实现了写作素材的共同占有，开阔了视野，还提高了选材构思的能力。
（三）作文评写课型
这种课型是指在老师的指导下对同学们的作文互批互改自己进行修改点评的方式，这种课型可以使作文评价更加科学全面，更有利于学生作文水平的共同提高。这种课型的大致环节是：课前撰文、自改―课堂交流与评析―课后再修改。其中课堂交流与评析才是这堂课要做的，可分为三个小环节：交流―评析―修改。
首先是小组交流，把写好的习作交给各小组，由小组长牵头选取自评自改，再小组内互评互改。具体做法是让习作者朗读习作，再由小组其他成员针对习作在字、词句、标点、选材、立意、结构等全面提出自己的意见，发表看法，提出修改意见，并各自修改自己的作文，然后推选1-2篇上交班级交流。其次就是全班交流与评析，由习作者在全班朗读，然后由全班同学各抒己见提出自己的意见，最后民主评议选优秀习作和最佳点评。习作者课后根据同学意见再次对自己的作品进行修改。
这种课型的最大特点在于学生在多次多层面（小组、全班）的合作中，见识了不同的作文风格与作文毛病，明确了作文修改的标准，这更有利于学生作文修改习惯和修改能力的形成与提高，有利于改出创新佳作来。
……
创新作文课型远不止以上三种，笔者认为，不论采用哪种作文课型，合作都是学生学习的一种重要方式，以上三例可见一斑。
合作，让作文课堂更有效。
【参考资料】
【关键词】 英语 阅读 教学 有效
阅读过程更多的是学生主体和文本材料之间相互交流的过程，英语阅读不同于中文阅读，因为在阅读过程中学生需要在掌握必要的英语知识基础上进行。故而要保证英语阅读的有效性，在高中英语阅读指导中，做好阅读前的知识准备就是基础。在推进阅读活动中，学生是阅读的主体，阅读材料是客体，而教师是联系学生和材料之间的桥梁。只有让学生这一主体充分地融入到材料中进行自主阅读，发挥好教师的主导作用而给予学生必要的点拨和指导，让学生在理解的基础上获得感悟，如此，阅读才会是有效的。反观高中英语阅读教学实践活动，教师依然是知识的讲授者，学生的参与度不高。因此，在高中英语阅读教学中教师就需结合教学实践而作出相应的改革。
1. 加强课前指导，准备阅读知识
在高中英语教学实践中，大多教师会把主要精力放在课堂中对语篇材料的讲解上，或以合作探究的方式而引导学生对语篇材料进行交流活动，而教学中发现很多学生在听讲或探究中却不能主动参与，原因何在？其实，阅读要经历前阅读阶段，即知识准备阶段，在阅读中如果学生没有掌握相应的背景知识，没有对语篇材料有初步了解，那么，无论是讨论还是交流，学生只能“人云亦云”。
故而在英语阅读教学实践中，加强课前引导，引导学生准备好阅读所需的知识就显得尤为重要。而这一方面需要学生提前了解材料的基本内容，另一方面则要让学生根据材料而了解相应的背景材料，积累相应的词汇、短语等，否则，学生在阅读课堂中只能听而不能主动融入，阅读效率自然不高。如“Advertising”的阅读教学中，如学生没有基本的广告常识，那么，对材料的理解也就容易遇到诸多困难。
在课前准备环节中，首先，基本词汇的学习是基础。很多教师喜欢将词汇教学放到课堂上进行，然后再进行语篇教学，其实这种做法效果不是很好，毕竟学生没有那么强的接受能力。故而在阅读教学中教师可提前教学词汇。如Module 3《Unit 1 The world of our senses》的教学中要求学生在文中找出下列单词和短语，并写出他们的中文意思：forecast、once、fare、observe、rest、in sight、wish for、watch out for、come to one’s aid、in relief等，这样做的目的可让学生先了解并学习词汇，为阅读奠定基础。其次，要结合材料让学生了解背景资料。如Module 4 《Unit 2 Sporting events》的阅读前了解相关的体育运动项目，知道一些常见的体育运动比赛规则等，这样，在语篇教学中学生合作交流时，也可拓展学生的话题，促进学生对材料的理解，提升阅读效率。
2. 结合阅读材料，创设情境激趣
在阅读教学中，学生的兴趣也是一个关键点。教学实践中，为让学生快速地了解材料的基本内容，做到心中有数，需要教师结合语篇材料和学生的实际而创设情境，以情境来激发学生的阅读兴趣。然从高中英语阅读教学实践来看，在情境创设中，一方面是太关注情境本身而忽视了在情境中启发引导引导学生，而另一个极端则是忽视情境和教材内容的联系性，没有结合学生的实际而阅读材料而创设情境。如此，情境没有起到真正的启发作用，相反因情境而占用了课堂时间，影响了课堂教学效率。
在高中英语教学实践中创设情境，要从学生的实际出发，结合语篇的内容而进行，要能起到激发学生的阅读兴趣，同时有要能让学生对语篇材料的内容做到心中有数。以Module 2《Unit 1 Tales of the unexplained》的阅读教学为例，该材料是围绕男孩失踪而展开的，而其中又有一些令人困惑的问题，标题是Boy missing， police puzzled.在导入环节中，教师可先请学生说说自己周围关于失踪的话题，然后围绕标题而展开提出问题，如：How/When/Where was the boy missing？ Why are they puzzled？ What are the police going to do about the boy’s disappearance and how？ 如此，学生自然会对材料产生兴趣，在引导学生初读个概括文章内容，学生也会对材料的内容有大致的了解。
3. 加强引导探究，促进知识构建
在情境的指引下学生初读，对材料内容有大致理解，接下来就是如何引导学生更进一步理解材料内容，掌握语法知识的关键环节，而在以往的阅读教学中，这些更多是交由教师讲解完成的，学生较为被动。相反，在这个过程中，可提倡合作探究的方式，利用问题引导，促进学生合作，在探究中完成对材料的理解和对知识点的掌握。以语法知识为例，当学生提到材料中所涉及的语法时，教师不宜直接讲解，而可提供类似的句子引导小组学生进行分析，然后再引导学生总结，最后教师再精讲归纳。如由“carry”而引导出的carry out、carry on、carry away、carry off等短语，可提供如：The plan should be carried out immediately. Despite all the noise， he carried on reading.等句子引导学生翻译，小组学生共同翻译后对比其不同，教师再指出不同并精讲。
在对材料的内容进行探究时，学生初步后引导小组成员对内容进行概括， 然后再以问题引导学生展开小组交流活动。如Module 5 《Unit 2 The environment》的教学中，以问题Who are the three speakers？ What side does Mr. Lin Shuiqing and Mr. Qian Liwei each represent？ By how many times has the world’s population increased since 1800？ 引导学生合作交流而初步了解内容，在此基础上小组学生围绕材料内容而回答：What society does Lin Shuiqing belong to？ What does Lin Shuiqing start his speech by talking about？ What is happening to large amounts of fish？ What does Lin Shuiqing think we should teach people about？ 小组合作共同解决问题：Why does Qian Liwei think production should not be cut back？ What does Qian Liwei say we should produce more of？ What does Qian Liwei say we need more of？ What does Qian Liwei say many people are willing to do？ 不断深入的问题让学生更好地了解了材料的内容，教师在学生解答后给予指导，针对学生解答问题中的不足而给予点拨，整个教学过程以学生为主体，让学生主动经历阅读过程，丰富其体验。
4. 关注学生体验，拓展应用巩固
在高中英语教学实践中，为了出成绩，追求升学率，很多教师对学生的体验都较为忽视，尤其是阅读教学中，但凡材料讲解清楚了也就意味着教学任务完成了，而学生在阅读材料中有什么体验，有什么收获教师并不关心。在教学中广大教师更多将注意力放在知识的传授上，而对文化的传承，行为的培养等并不是很重视，在阅读教学中关注学生的体验，结合阅读内容而多给学生创造表现的机会，让其在表达、交流、解决问题等活动中获得满足感，这对学生的发展意义重大。
以Module 1 《Unit 1 School life》为例，在该单元的教学后，可展开“各国学生学校生活大比拼”活动，让学生在了解其它国家学生的学校生活后和自己形成对比，由此活动还可让学生形成小论文，也可展开辩论活动，如此，可带动学生听、说、读、写等一系列的表达活动。又如Module 5《Unit 1 Getting along with others》的教学后展开与人相处的心得体会，也可让学生分享和他人相处的一些技巧。
关键词：写作能力；“言之有物”；直接经验；间接经验；紧扣教材
中图分类号：G633.34 文献标识码：A 文章编号：1671-0568(2012)25-0149-02
如果我们问学生感到写作文有何为难之处，十有八九会说不知道写什么，或怎样写——在批改学生作文时，也会发现内容或词汇贫乏这一现象。写作文，简单来说就是离不开两个方面：写作素材和文字表达（写什么和怎样写）。两者是内容和形式的关系，内容决定形式，形式反映内容。对于中学生来说，不管是什么类型的作文，首先要解决的是“没有什么可写”这种困惑，也就是作文要“言之有物”的问题。
让学生“言之有物”有哪些途径？笔者认为首要的是认识生活，只有认识生活才能在生活中提取可以作为素材的内容，而认识生活就需要实践，因为认识源于实践。
一、体验直接经验，在生活中发现素材
生活是写作的源泉。现实生活包罗万象，生活丰富多彩，任何文章都是社会生活在作者头脑中反映的产物。我们要训练学生学会观察生活，学会捕捉素材，以解决作文中普遍存在的“言之无物”的问题。由于初中学生阅历尚浅，知识欠缺，能力薄弱，自觉而有意义的观察习惯仍处于待形成或正形成阶段。因此，初中学生的观察活动在很大程度上具有盲目性或是随意性。为了获得良好的效果，教师需要指导学生在观察生活时给予定向指引，让学生带着任务捕捉写作素材，做生活的有心人。学生平常除学校生活外，跟社会、大自然广泛接触，课外生活十分丰富。我们可以要求学生把他们自己亲眼看到的，或是媒体中报道的，或是他们所想所感的，以题材日记或观察片段的形式记录下来，可以是一段对话、一处风光、一个活动场面、一个生活细节等。或有计划地组织学生开展社会活动，如参观、旅游、校运会、文艺汇演、语文实践等，这些都是学生第一手珍贵的写作素材。
二、积累间接经验，在阅读中丰富素材
间接经验依靠媒体，如电视、网络、音像、书籍等。阅读对于丰富学生写作素材起着极其重要的作用。心理学研究表明，阅读是内化的吸收，是对基础知识理解的过程；作文是外化的表达，是对基础知识运用的过程。通过阅读记忆，积累了丰富的语文材料，表达才能“言之有物”。此外，阅读还能为作文提供范例，是提供技能模仿运用的直观形式。
叶圣陶曾阐述了读写关系：阅读任何文章，主要在得到启发，受到教育，获得间接经验等，而在真正地理解的同时，咱们对文章的写作技巧必然有所领会，可以作为练习写作的借鉴。事实上，大量的阅读让学生积累了丰富的写作素材：
①积累题材。书里面有很多自己未曾见到，未曾听到过的现象和事实，可以通过读书来获取这些信息，阅读哪一类型的书籍，就会对相对的事物有更深一步的认识。
②积累语言。古往今来，大至文学巨著，脍炙人口的佳作，小至报章杂志，无一不具备丰富的语言材料；同时，大量的阅读中，对词汇、修辞、语法等知识也会潜移默化的吸收。
因此，我们要尽力营造良好的阅读环境，利用好图书馆的同时建立班级图书角，通过进行“我最新知道”课外知识交流、出《读书心得》板报、展示“锦言本”等活动，让学生有阅读的时间和空间，有阅读资源与知识的互动交流，能较好地获得间接经验。
三、紧扣教材，在课堂上把握素材
1.紧扣课文教学。课文题材、体裁多样，内容丰富，具有较强的时代感。其中精读课文就是教材的主体和进行语文基本功训练的主要素材，教师在教学中要有意识地把阅读教学当作是丰富写作素材的途径，课堂上引导学生对课文作深入细致的分析与体味，有助于学生牢固地掌握课文题材、言语材料与写作知识。可以让学生坚持做读书笔记，写积累卡，以丰富写作素材。
【关键词】高中英语 阅读教学 网络资源 应用
高中阶段的英语阅读教学中，教师要鼓励学生对于学习过程的主体性的发挥。要让学生积极进行知识的获取，并且透过各种有效的方式锻炼自身的语言技能，丰富语言积累。学生对于网络的应用都非常熟悉，这也给学生利用网络资源来进行英语阅读训练提供了良好的前提。教师可以给学生指引一些具体的方向，让学生能够在网络平台上锻炼自己的阅读素养。
一、丰富学生的词汇积累
网络资源的应用的一个最直接的功效就是可以很大程度丰富学生的词汇积累，只有学生的语言积累越来越充实，学生进行阅读时障碍才能够慢慢减少。很多学生都知道网络上有很多有价值的阅读素材，有很多可以锻炼自身阅读能力的训练网站，但是，学生就是不愿意点进去，不愿意阅览这些内容，学生可能更喜爱在网络上聊天或者看视频。这是学生的一种普遍心理，这种心理也很容易理解。为此，教师要想办法化解学生的这种惰性，让学生愿意融入到阅读训练中。一方面，教师可以给学生指定一些硬性的学习任务，这些任务都是基于网络环境下完成，这会逐渐培养学生在互联网上进行阅读训练的习惯。另一方面，教师可以给学生推荐一些有意思的英语学习的网站，尤其是要结合学生感兴趣的内容让学生进行阅读训练。这样学生参与的兴致才会更高，网络资源的价值也会充分体现出来。
教师可以查阅China Daily或者Chicago Time等这样的英语新闻网站去查询一些有关话题，如：Eating habits，School homework，Traveling…并且对其中适合学生学习的文章和段落进行摘录，在课堂进行教材讲解的同时，也对摘录内容进行讲解，包括生词的讲解以及短语表达的讲解。这个过程中，学生不仅对教材内容进行了全面了解，同时也对教师延伸的知识点进行了掌握，拓宽了知识面，也扩充了学生词汇量。这就是一种非常灵活的利用网络资源来展开阅读教学的方式，这种模式对于丰富学生的语言积累能够起到的效用也较为显著。
二、有助于学生接触原声材料
网络环境下学生有大量接触原声材料的机会，学生在听这些内容时不仅是对于自己的语音能力和发音标准的一种锻炼，这些原声材料也是很有价值的一种阅读素材，学生在听这些内容的过程中需要仔细分析文本，领会文意，这同样是一种潜移默化的对于学生阅读能力的锻炼。教师可以鼓励学生多听一些优质的英语电台，让学生慢慢接触这些原声材料，学生的语言水平会一点点得到锻炼，语言的感受能力也会不断增强。
例如，学习The World of Science这篇课题时，教师可以采取BBC、VOA等新闻类的材料，比如Not rocket science，Laughing to death等都是与课题相关的材料。这些新闻材料是针对事实问题进行的陈述性、说明性或者议论性的实况阐述，所以不仅对学生的阅历积累有着促进作用，而且对学生的信息捕捉能力有着极大的锻炼。让学生多借助这些材料对于学生学生思维的敏捷性、信息的提取能力以及阅读理解能力都能够发挥极为显著的效果。
三、提升学生的语言表达技能
关键词：复合材料；课堂教学；应用研究
中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2015）29-0138-02
一、背景
学―导互动授课方式是以学习者即学生本身为主体，并与教师的传授即引导为辅助，借助于现在开放的多元网络资源，来实现“学生自学”与“教师导学”的有效结合，达到提高教学质量的目的。其研究最早是1999年，中央广播电视大学把这一教学方式带入课堂，借助网络大量资源平台，达到了学生自主学习和教师引导学生学习的有效互动。整个授课过程中，“学生学习”代表学生能自发主动的去寻求知识，“教师导学”表示教师的引导教学行为，这种课堂教学方式突出了以学生为主体的思想，把学生放在第一位，为其提供各种各样全方位的服务，一方面使学生掌握了课堂知识，另一方面也转变了传统的灌输教育方法，这种授课方式的实施，不仅适应当今社会教育的演变，而且改变了传统讲课方式的束缚，为现代教育方式的改革提供新思路。
对于工程教育改革，我们可以向成熟的工业化国家吸收大量的经验，避免走弯路。20世纪90年代欧盟颁布的教育改革方案中谈到了从学前教育到大学教育的各种各样的教育，当中，欧洲维度重点提出的一些问题包括：学习者本人的动机和动力；教育的方式和主干课程；怎样改变教育方式和增强学生整体学习能力。而这正符合学导多元互动授课模式的具体内容，该项目由欧洲一些权威高等教育部分及相关机构联盟单位来主管，获得了非常好的评价。最近，国内的很多知名高校已经开始采用学导互动授课方法在大学生的教学方面开展了全面的应用和探究，比如江苏省电大的一些试点单位中整体师生积极使用这一方式成效明显，教师的讲课方法发生了显著改变，大学生的自主学习和老师之间的交流有较大改善，促进高校教育质量的提高，确保大学生人才目标的培养。
《复合材料概论》是无机非金属材料工程专业本科生的一门专业选修课。目的是使学生在掌握金属材料、无机非金属材料、高分子材料基础知识的基础上，拓展该材料的应用领域，挖掘各类材料的应用潜能。传统的课程体系虽然充实，但缺乏各种材料的协调性，尤其是当代科学技术飞速发展下的结构与功能一体化复合材料的研究与设计，已不能适应新的培养目标要求。因此，对该课程进行教学内容的调整和教学方式的改革，将原有的课程体系进行优化整合，建立以复合材料基本概念――原材料性能及设计――复合界面性能――产品加工及性能为主干，适当补充材料结构及物性是必要的。从教学模式上来讲，传统模式教育以课程教授为主，学生的能动性差，教师和学生之间的交流和沟通不多，这对发挥学习者的个体行为不利，且与培养工程人才目标不符。所以，将“学―导多元互动”教学模式引入该课程是必要和迫切的。
二、学生自学与教师导学互动授课方法的应用研究
（一）多元互动授课方法的内涵和扩展
这种讲课方法的含义是以当今网络资源为基础，以大学生自身自发学习为主体，即学生本身自主、自发和能动性的自觉学习，与老师引导教学相结合，通过丰富的网上资源，把学生自主自发学习与老师引领学习有机地结合在一起，实现多元交流。在整体授课过程中，得到了无机非金属材料专业其他教师的认可，并有望在他们的课堂上应用，同时，经探讨后对教师的引导学习和学生自发学习的交流互动方式有针对性的概括为五点要素：
1.学生自主学习方面，主要表现为根据自身特点制定学习方法、自主选择感兴趣的学习内容、自主掌控学习进度、自主利用网络资料、自主养成学习的习惯；
2.教师引导学习方面，主要表现为详细指导学生的学习方式、仔细辅导学生的学习内容、全面引领学生的学习过程、定时督导学生的学习进度、积极洞察学生的内心世界。学习自主学习与教师引导学习是以当代开放的网络资源为基础的授课方法，充分使用开放资源及各种平台来得到全面的信息，主要特点是适应现代教育发展趋势，最大程度利用网络资源获得最前沿、最丰富的各种知识和信息，体现了当今飞速发展下教育的主要特点。
（二）学生自发学习
大学生自发自主的学习是整个学导互动交流方式的核心部分。教师在课堂授课过程中，要积极地营造一个自由、开放、宽松的学习气氛，使大学生在舒适的气氛中可以自由自在地、无束缚地提出自己的观点，激发内在的情感，达到师生之间良好的交流互动，使大学生能够全方位的思考问题，寻求解决问题的方案，这样才能使他们培养成创新型思维。
1.课前预习，分配任务：各个小组从老师那里选择、领取各自的任务，并且利用相关书籍、网上资源等了解一些初步的相关内容，提前准备。
2.课上研究，积极讨论：在上课及小组讨论时把每个人掌握的知识资源与其他人进行充分的共享，互相取长补短，充分交流，达到良好的学习效果。
3.课后扩展，积极思考：上课结束后学生对上课的知识还存在一些延伸的想法，课后继续对课上内容进行深入讨论，形成各自的想法和观点，这样亲身经历的所获得的知识掌握的较牢固，即变成自己所掌握的知识，这是学生自主学习的真正核心。
（三）教师导学
教师导学是整个授课教学的关键部分。老师的角色发生了改变，从“灌输”改变为“引导”，变成大学生的朋友、鼓励者、引导者、激励者、整个讲课过程的设计师、课堂质量的掌控者。在授课的各个阶段，老师的适当引导不仅使整个授课活动顺利进行，而且能够使大学生的学习处在一个积极可控的范围，不会偏离教学主线或者被一些不恰当的言语所干扰。
1.适度导学。授课过程设计时，每个老师要根据所上课程的特点，仔细设计适合于大学生自发求知的讲课实施方法，全面使用网络资源的丰富、快捷帮他们整理素材，指导各分组的呈现方式，结合授课思维，使学生创立正确的想法，迈出网络资源的误区。
2.适当监督。根据学生自身的特点，由于他们社会阅历尚浅，往往对问题的看法、思考、解决能力不太全面，这就需要教师适当调节知识的层次，制定出适合学生学习的知识要点、培养目标、整体授课的难点和重点，不仅使学生掌握基本的内容和理论，而且使他们锻炼通过表象看核心的本领和全面分析解决问题能力，能够自我约束网络诱惑，积极正确使用资源。
3.定时开导。网络资源是双方面的，因为一些原因，目前的网络系统还不十分成熟，还需进一步的建设和完善，但是现在的很多学校老师和家长把网络看成是毒瘤，他们不让孩子上网，怕影响学习，想尽办法让孩子不与网络接触，但这是不可能实现的，可以采用适当疏通的方法来改善，使学生自发学习一些有益的丰富知识，树立正确学习的方向，让网络资源更好地为学生服务。
（四）学导交流互动授课理念的成效
新授课理念的诞生是以实际教学活动为起源，也必须经过实际教学活动来验证，新教学方法是否有效，是由学习者本身对需求的满足程度来决定的。
1.教学和讲课方法的变化。教师角色发生改变，从灌输教学转变为引导教学，在讲课中教师基本采用多媒体资源实施教学活动，而且适当使用丰富网络信息来交流互动。在这种方法下，教师本身必须提高要求，不能像以往上课时的死记硬背，要采用引领式、启发式、互动式、激励式等，来实现与学生之间更好地沟通和交流，改变过去上课方法。这种老师的授课方法和教学细节展现了以多媒体资源为中介，教师引导学习和学生自主学习相结合的当代教育新思想，也突出了教师引领学习的重要地位。
2.学习方法的改变。学导交流互动授课方式的实施和应用，使学生转变了学习的方法，引领学生者本身使用网络资源来自发学习，增强了学习者采用丰富多样的学习资源来自发自主求知的意识，自学能动性显著提升，学生之间、师生之间的联系互动大大增加，而且，这种交流互动方式的应用提高了网络教学和网络信息的利用率，增强了学生自发学习的能动性和自发性，学习能力得到增强，教师与学生交流互动显著改善。
3.提升了远程开放授课质量。学导交流互动授课方式的实施，得到了广大学生的一致好评，充分展示了当代飞速发展社会教育体制下教学模式的前瞻性。第一，老师的授课方法、授课思路、授课手段发生显著的改变，打破传统教学方式的桎梏，展现了教师引导、学生自发自主学习及网络资源等最佳组合的现代教育思维和方法。第二，大学生本身的求知方式改变了，学生之间与师生之间的交流互动明显增加了，不仅使学生自发学习的能动性得到提到，而且从被动学习变为主动学习。第三，这种交流互动教学方式的创立，使学生对网络世界的丰富资源和大量功能得到了解，对使用技能和知识素养不断提高，建立了良好的网络服务意思。
三、结语
学―导多元交流互动教学方式在《复合材料概论》课堂中的应用取得了较好的实际效果，获得了广大学生的一致好评，表现了现代高速变换社会下大学教育方式的华丽转变，也使学生在当今知识爆炸的时代树立起良好的求知欲，不仅使学生的“自学”和教师的“引导”有效的结合在一起，而且打破了传统教学的桎梏，极大提高了教学质量。
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【关键词】可理解性输入 口语教学 口语交际能力
一、引言
语言的基本功能是交际。能够流利地用语言进行交际是人类的基本需求，英语这门语言也不例外。随着全球经济一体化进程的加深，英语作为全球通用的交流工具，在当今国人纷纷走出国门放眼全球的时代潮流下，突显出重要的作用。然而当今的大学英语教学更侧重英语的听，读，写方面，对于学生口语能力的培养关注较少，致使口语教学成为大学英语口语教学中的薄弱环节。此外口语教学多受传统教学方式的影响，导致可理解性输入严重不足，教学效果大打折扣。本文将可理解性输入理论应用到口语教学当中，从听力输入，阅读输入，背诵输入，文化输入四个方面，探讨可理解性输入理论在大学口语教学的应用，得到了一些启示。
二、输入理论的有关概念
美国语言学家克拉申提出的输入理论在二语习得的理论中影响显著。他提出的输入理论强调可理解性输入。可理解性输入是学习者将输入内化的前提，要使语言习得发生，须要让学习者听到或者读到可以理解的语言材料，其难度应略高于学习者目前已经掌握的语言知识，即“i+1 ”理论。他还强调，语言使用能力如口语，不是教出来的，而是随着时间的推移，接触大量可理解性输入之后自然获得的。随着应用语言学的发展，越来越多的英语教学研究者已转向输入理论的研究，输入理论在口语教学中扮演着越来越重要的角色。
三、输入的有效途径
听力输入。听力是口语学习的一个重要途径，是口语教学的基础。学习者要掌握一门语言，首先必须提高听力水平。只有听得准确，才能说得流畅。Cook曾说过：“人们都是通过听来学会说，正是通过听与人交流使得我们能更好的帮助学生提高其口头表达能力”。因此，在教学过程中，教师应尽可能地为学生提供充足，真实，贴近其理解能力的听力材料。教师可以通过以下方式来提高口语交际能力，第一，跟读。学生通过听录音的方式进行跟读。教师可以选择四级真题听力短对话作为跟读材料，教师放录音，学生按座位顺序依次跟读，教师观察每个学生的发音和语调是否准确，不准确的予以纠正，保证学生口语表达时发音和语调的准确性。第二，复述。教师可以选择四级真题听力长对话作为复述材料。学生听完长对话的录音后，凭借自己的记忆进行复述。还可以将学生分成小组依次复述。凭此方式，学生可以在听到材料并理解的基础上使用自己的表达方式，提高口语表达的能力。课余时间教师可以鼓励学生听一些适合的节目，例如VOA慢速英语，为口语交际打下良好的基础。
阅读输入。阅读是学生积累丰富口语资源的主要途径。学生在教师的指导下有选择的阅读，是提高学生口语交际能力的一个重要环节。教师在阅读材料的选择上应注意篇幅不可过长，难度不宜太大，以及阅读材料的多样性和真实性。以笔者使用的《大学体验英语》第二册中第一单元“Famous University”为例，教师可以让学生浏览全文，并提出文章相关的问题供学生思考回答。其次，还可以结合文章内容，提问与学生有联系的问题，例如学生如何看待自己的大学，对今后的大学生活有什么规划。此外，教师对文章中出现过的 词块、固定和半固定的语言搭配，习语、谚语进行延伸讲解，为学生积累丰富的语言输入。课余时间，教师可以推荐学生看一些英文报刊杂志，进一步为口语交际积累丰富、真实的材料。
背诵输入。背诵是口语学习中不可或缺的环节。背诵有助于学生培养语感，掌握发音和语调。教师可以将课前口语展示这种形式应用到课堂教学中，给予学生充足的展示时间和表演空间，展示材料学生可以自由选择。由于选择的自主性，学生会选择感兴趣的材料或是经典的美文理解，熟读，背诵并展示在大家面前。课堂的时间有限，教师可以指导学生利用课余时间多背诵难度适宜的对话、台词或者短文。在背诵输入过程中，学生一方面练习了英语发音和语调，另一方面也能体会到英语语言的优雅和精致，形成语感使口语表达更加流利自然。
文化输入。文化差异在跨文化的口语交流中有着重要的影响。因此教师在教学过程中应多融入文化因素，增加文化输入，避免差异性带来的口语交际误解现象。在课上，教师多介绍西方文化知识。从西方宗教、节日到西方寓言、神话，都可以与学生探讨。例如万圣节，课堂上教师可以讲解万圣节的来历、发展以及独有的习俗，共同学习万圣节南瓜灯的由来。除了课上有限的文化输入外，课外教师更应引导学生多接触经典的英语金曲，影视作品，多参加英语角，英语歌曲大赛等活动，鼓励学生多与外国友人面对面的口语交流。频繁的文化接触可以使学生了解西方价值观，培养英语思维方式，促进口语交际的准确性和有效性。
四、结论
英语口语学习是一个不断积累，循序渐进，潜移默化的过程。这就要求教师能通过课内课外多种教学活动、多种手段提高学生的听力输入，阅读输入，背诵输入以及文化输入，促使学生的口语水平得到提高，以满足现今社会发展和国际交流的需求。
参考文献：
关键词 磷酸化肽； 反相/强阴离子交换材料； 富集
1 引 言
磷酸化修饰是重要的蛋白质翻译后修饰方式。蛋白质的磷酸化能够调控细胞的增殖、发育、分化和信号转导等重要的生命进程[1]， 具有重要的生物学意义。然而， 在通常的质谱分析中， 磷酸化肽的信号会被其它高丰度的非磷酸化肽所抑制， 导致磷酸化肽难以分离鉴定[2，3]。因此有必要选择性地富集磷酸化肽[4]。目前， 富集磷酸化肽的材料主要有固定金属螯合色谱（IMAC）材料[5～7]、氧化钛（TiO2）[8～10]、离子交换色谱（IXC）材料[11]、亲水作用色谱材料[12]等。强阴离子交换色谱（SAX）在磷酸化肽选择性富集中效果显著。然而， SAX在富集磷酸化肽时， 带有相同电荷的肽会被同时洗脱；另外， 单磷酸化肽信号会抑制多磷酸化肽的信号。因此， 发展能兼顾单、多磷酸化肽选择性富集的材料非常重要。
反相/强阴离子交换材料（C 18/SAX）是一种能够同时提供疏水和强阴离子交换作用的新型色谱材料， 采用极性共聚的合成方法将十八烷基键合相和季铵碱按照一定可调控比例键合到硅胶表面[13]。研究表明， 此材料对于极性不强的阴离子小分子（例如马兜铃酸）具有较强的保留[13]， 但尚未有用于磷酸化肽的选择性富集的报道。就结构特点而言， 磷酸化肽在一定pH条件下也以阴离子形式存在， 但其分子量相对较大， 在C 18/SAX上的保留机制应该与小分子有一定差异， 因此有必要考察C 18/SAX对磷酸化肽的富集效果以及保留机制。
本研究以标准蛋白α.Casein酶解物作为模拟样品， 考察不同流动相条件（乙腈含量、甲酸浓度、缓冲盐浓度）对磷酸化肽在C 18/SAX材料上的富集选择性差异， 优化了分离富集条件。在此基础上， 对牛奶中的磷酸化肽进行富集和分析， 效果良好。本方法有望用于实际样品中磷酸化肽选择性富集。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
肽的分析在Nano.LC.ESI.Q.TOF/MS仪器（英国Waters MS Technologies公司）上进行， 离子模式为正离子模式， 喷雾电压为2.0 kV。一级质谱数据采集范围为m/z 500～2000， 二级质谱数据采集范围为m/z 100～2000， 二级质谱的碰撞能为20～40 eV。
乙腈（ACN， 质谱纯， 德国Merck公司）； 甲酸（FA， 色谱纯， 美国Acros公司）； 醋酸铵（NH4Ac， 美国Tedia公司）； NH4HCO 3、二硫苏糖醇（DTT）、碘乙酰胺（IAA）， α.酪蛋白（Casein）、人血清白蛋白（HSA）、尿素（美国Sigma.Aldrich公司）； 质谱序列级胰蛋白酶（美国Promega公司）； GELoader小柱（德国Eppendorf 公司）。C 18/SAX材料为实验室自制[12]；ZipTip C 18色谱柱（美国Millipore公司）。实验用水为超纯水（美国Millipore纯水系统）；脱脂牛奶购自本地超市。
2.2 蛋白质的酶解
α.Casein的酶解：1.0 mg α.Casein溶于1 mL NH4HCO 3 （50 mmol/L， pH 8.0）溶液中， 按照α.Casein/胰蛋白酶=40∶1（m/m）的比例加入胰蛋白酶， 37℃下酶解反应18 h后， 加入0.5%甲酸终止反应。酶解液最终蛋白浓度为1 mg/mL， 在
20℃保存， 待测。
HSA的酶解：将1.0 mg HSA溶于100 μL含8 mol/L 尿素的50 mmol/L NH4HCO 3， 56℃变性10 min。 加入20 μL 100 mmol/L DTT， 于56℃反应1 h。冷却至室温后， 加入20 μL 200 mmol/L IAA， 在暗处反应 30 min。用 50 mmol/L NH4HCO 3稀释至1 mL后， 按照蛋白质/酶=50∶1（m/m）的比例加入胰蛋白质酶， 37℃酶解12 h后， 加入5 μL甲酸中止反应， 酶解产物于
20℃保存。
脱脂牛奶的酶解： 用Bradford assay法测得脱脂牛奶中蛋白质浓度为20 mg/mL， 用50 mmol/L NH4HCO 3稀释至2 mg/mL， 取100 μL上述溶液按照HSA的酶解方法进行处理， 但是酶解时间延长为16 h。
2.3 磷酸化肽富集条件
按照文献[14]的方法制备GELoader小柱， 每个GELoader小柱装填有1.5 mg C 18/SAX材料， 用于富集磷酸化肽。条件优化实验：α.Casein酶解液86 pmol上样后， 分别用0.1% FA 溶液， 10%、20%、30%和40% ACN/0.1% FA 溶液各20 μL进行洗脱， 考察流动相中乙腈浓度对富集选择性的影响；α.Casein 酶解液上样后， 依次用50% ACN/0.1% FA （pH 4）、0.5% FA （pH 3）、1% FA （pH 2）、2% FA（pH 1）溶液各20 μL进行洗脱， 考察流动相甲酸浓度对富集选择性的影响；α.Casein酶解液上样后， 依次用50% ACN/10 mmol/L NH4Ac、20 mmol/L NH4Ac、50 mmol/L NH4Ac、100 mmol/L NH4Ac、200 mmol/L NH4Ac溶液20 μL进行洗脱， 考察流动相中醋酸铵浓度对富集选择性的影响。优化实验中各个洗脱液， 离心、浓缩干燥后， 用50% ACN/0.1% FA溶液（10 μL）复溶， ZipTip C 18脱盐， 取5 μL进行质谱分析。
在优化的条件下， 进行α.Casein/HSA=1∶20 （n/n）模拟样品以及脱脂牛奶的磷酸化肽富集。将α.Casein与HSA酶解液以摩尔比为1∶20进行混合， 上样量按混合液中α.Casein为86 pmol计。取6 μL牛奶酶解液与20 μL上样溶液混合作为脱脂牛奶的样品溶液。富集后， 收集洗脱液， 离心、浓缩干燥后， 用50% ACN/0.1% FA（10 μL）复溶， ZipTip C 18脱盐， 取5 μL进行质谱分析。
3 结果与讨论
3.1 乙腈浓度对磷酸化肽富集选择性的影响
考察了流动相中乙腈浓度对磷酸化肽富集选择性的影响。实验结果如图1所示， 10% ACN/0.1%FA洗脱馏分中能够检测出5条磷酸化肽的信号， 分别是m/z 770.29 （2+）， m/z 797.83 （2+）， m/z 831.37 （2+）， m/z 907.26 （3+）， m/z 912.53 （3+）， 参考文献[8，14]并根据二级质谱结果确定磷酸化肽的结构信息（表1）。在20% ACN/0.1%FA洗脱馏分中检测出9条磷酸化肽信号， 分别为m/z 733.80（2+）， m/z 770.29（2+）， m/z 797.84 （2+）， m/z 830.88 （2+）， m/z 889.44 （3+）， m/z 971.47 （2+）， m/z 976.45 （2+）， m/z 979.55 （3+）， m/z 991.53 （2+）， 均带有1～3个PO3
4。在高有机相浓度40% ACN/0.1%FA洗脱液中检测出5条磷酸化肽信号， 即m/z 706.69 （2+）， m/z 865.32 （3+）， m/z 924.32 （2+）， m/z 979.36 （3+）， m/z 1339.48 （2+）， 均带有2～5个PO3
4。值得注意的是， 通常情况下， 由于多磷酸化肽极性较强， 其在反相色谱材料上保留弱于单磷酸化肽。而在本研究中， 多磷酸化肽保留强于单磷酸化肽。这可能是磷酸化肽在C 18/SAX材料上的保留是疏水作用和离子交换作用的协同结果。20% ACN/0.1% FA洗脱馏分中少有多磷酸化肽信号出现， 这可能是因为溶液pH=2.5～3.0， 材料表面基团带有正电， 多磷酸化肽pKa值小于流动相pH值， 带有负电， 此时磷酸化肽的保留主要取决于阴离子交换作用， 而单磷酸化肽pKa值大于流动相pH值， 不带电性或带正电， 此时保留主要取决于疏水作用。上述结果表明， 通过改变流动相中乙腈浓度能够实现单、多磷酸化肽顺序洗脱， 磷酸化肽的保留受到疏水和离子交换作用力的双重调控。然而仅通过改变流动相中乙腈浓度进行选择性富集， 存在非磷酸化肽的信号干扰较强、磷酸化肽富集选择性不高的问题。
3.2 甲酸浓度对磷酸化肽在C 18/SAX材料上保留的影响
考察了流动相中甲酸浓度（pH值）对磷酸化肽在C 18/SAX材料上保留的影响（图2）。在保持乙腈浓度（50% ACN）不变的条件下（此浓度能够洗脱出大多数肽）， 考察了流动相中甲酸浓度（0.1%， 0.5%， 1%， 2% FA）对磷酸化肽在C 18/SAX 上保留的影响。当甲酸的浓度为0.1% （pH 4）时， 以单磷酸化肽为主的信号出现， 如m/z 733.79 （2+）， m/z 770.30 （2+）， m/z 797.83 （2+）， m/z 830.43 （2+）， m/z 924.34 （2+）， m/z 964.31 （2+）， m/z 976.43 （2+）， m/z 1029.45 （2+）。当甲酸浓度增加到0.5% （pH 3）时， 多磷酸化肽得以洗脱， 如m/z 1339.98 （2+）， m/z 1002.26 （2+）， m/z 983.29 （2+）， m/z 964.31 （2+）， m/z 893.65 （3+）。当甲酸浓度增加到2% （pH=1）时， 仍然有多磷酸化肽信号出现， 如m/z 964.36 （2+）， m/z 1312.43 （2+）， 但信号强度很低。上述结果表明， 采用C 18/SAX富集α.Casein中的磷酸化肽， 随着溶液中甲酸的浓度逐渐提高（pH值逐渐降低）， 磷酸化肽保留减弱；上样和洗脱溶液中的甲酸浓度分别为0.1%和2%为宜。通过调节流动相pH值能够实现单、多磷酸化肽的分段洗脱， 是因为单磷酸化肽的pKa值大于多磷酸化肽的pKa值；当流动相pH值小于磷酸化肽pKa时， 磷酸化肽不电离， 与SAX材料的离子交换作用减弱， 从而得以洗脱。
3.3 盐浓度对磷酸化肽在C 18/SAX材料上保留的影响
保持流动相中乙腈浓度（50% ACN）不变， 考察了流动相中醋酸铵浓度对磷酸化肽在C 18/SAX上保留的影响（图3）。采用50% ACN/10 mmol/L NH4Ac为流动相时， 洗脱液中主要出现带1～2个PO3
4的磷酸化肽， 如m/z 651.63 （3+）， m/z 733.78 （2+）， m/z 797.82 （2+）， m/z 830.87 （2+）， m/z 841.86 （2+）， m/z 865.30 （3+）， m/z 971.53 （2+）， m/z 976.94 （2+）。 随着流动相中NH4Ac增加到50 mmol/L， 这些磷酸化肽仍然能够洗脱出来。而当流动相中盐浓度提高到100 mmol/L NH4Ac时， 带有3～5个PO3
4的多磷酸化肽得以洗脱， 如m/z 893.65（3+）， m/z 916.90 （2+）， m/z 924.3294 （2+）， m/z 964.31 （2+）， m/z 983.28 （2+）， m/z 1002.26 （2+）， m/z 1339.95 （2+）， m/z 1373.91 （2+）。这是因为在离子交换作用下，多磷酸化肽比单磷酸化肽在C 18/SAX上的保留更强， 提高流动相盐浓度能够减弱PO3
4与C 18/SAX材料的离子交换作用。上述结果表明， 盐浓度的逐渐增高能够实现单、多磷酸化肽分段洗脱， 溶液中盐浓度提高到100 mmol/L NH4Ac时，大多数多磷酸化肽能够被洗脱。
3.4 C 18/SAX材料的富集选择性
将α.Casein酶解液.HSA酶解液（1∶20， n/n）配制的混合样品溶液作为模拟样品， 以20% ACN/0.1% FA和50% ACN/2% FA/100 mmol/L NH4Ac分别作为两步洗脱条件， 分段洗脱单磷酸化肽和多磷酸化肽， 结果如图4所示， 单、多磷酸化肽得到分段洗脱， 其中单磷酸化肽主要出现在20% ACN/0.1% FA馏分中， 共检测到4条单磷酸化肽信号， 如m/z 797.86 （2+）， m/z 830.89 （2+）， m/z 924.69 （2+）， m/z 976.99 （2+）；而多磷酸化肽主要出现在50% ACN/2% FA/100 mmol/L NH4Ac馏分中， 共检测到14条多磷酸化肽信号。与文献[14]的结果相比， 大量非磷酸化肽去除， 磷酸化肽信号强度显著提高；在优化条件下， 单、多磷酸化肽在C 18/SAX材料上能够被同时富集并分段洗脱， 此结果未见文献报道。上述结果表明， 采用优化后的分离条件， 对模拟样品的磷酸化肽富集效果较好。
3.5 牛奶中磷酸化肽的富集
将牛奶样品进行酶解， 然后采用C 18/SAX进行富集和洗脱， 并用纳升电喷雾.四级杆.飞行时间质谱联用系统进行分析。从图5可见， 20% ACN/0.1% FA馏分中出现了4条单磷酸化肽信号， 包括m/z 733.81（2+）， m/z 797.86 （2+）， m/z 831.39 （2+）， m/z 976.98 （2+）。50% ACN/2% FA/100 mmol/L NH4Ac馏分中出现了8条多磷酸化肽信号， 包括m/z 915.96 （3+）， m/z 928.95 （3+）， m/z 964.34 （2+）， m/z 983.33 （2+）， m/z 1002.30 （2+）， m/z 1333.47 （2+）， m/z 1339.51 （2+）， m/z 1373.43 （2+）。从牛奶中鉴定出的多磷酸化肽数目高于文献[5]的结果， 表明所建立方法具有较强的实际应用价值。
4 结 论
本研究将新型分离材料C 18/SAX用于磷酸化肽的选择性富集， 以α.Casein酶解液作为分析样品， 系统考察流动相组成条件对富集选择性的影响。结果表明， 磷酸化肽在C 18/SAX上的保留受疏水作用和离子交换作用的共同影响。在此基础上，建立了单、多磷酸化肽的同时富集和分段洗脱方法， 其中20% ACN/0.1% FA洗脱馏分中主要为单磷酸化肽， 50% ACN/2% FA/100 mmol/L NH4Ac洗脱馏分主要为多磷酸化肽。采用本方法可从α.Casein酶解液和HSA混合液（1∶20， n/n）中分离检测到4条单磷酸化肽信号和14条多磷酸化肽的信号， 从牛奶中共检测到4条单磷酸化肽和8条多磷酸化肽信号。本研究结果表明， 本方法具有较强的实际应用价值 。
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