首页 期刊 第二军医大学学报 人FcγRⅡ真核表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立 【正文】

人FcγRⅡ真核表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立

作者:席俊 张改平 张利娜 张红 乔松林 苗现伟 何礼洋 张乃生 吉林大学畜牧兽医学院 长春130062 河南省农业科学院 郑州450002
cos7细胞   免疫荧光检测   玫瑰花环试验  

摘要:目的:建立稳定表达人FcγRⅡ(human Fc gamma receptor Ⅱ,huFcγRⅡ)的真核细胞系,为后续研究奠定基础。方法:采用RT—PCR方法从人外周血白细胞合成FcγRⅡcDNA,构建huFcTRⅡ表达质粒pcDNA3huFcγRⅡ,经酶切和PCR鉴定后,将pcDNA3-huFcγRⅡ质粒通过脂质体转染法转染COS7细胞,并经G418筛选获得稳定表达huFcγRⅡ的细胞克隆。采用免疫荧光法和玫瑰花环试验检测huFcgRⅡ的表达。结果:构建的pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒经酶切鉴定与预期一致,稳定转入COS7细胞后,经免疫荧光染色,约90%的转染细胞可见荧光,而未转染的COS7对照细胞未见荧光。结论:成功构建pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒.建立了稳定表达huFcγRⅡ的细胞系,为进一步研究奠定了基础。

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